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上海研輝生物科技有限公司

人CAT ELISA檢測試劑盒

時間:2012-3-5閱讀:207
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本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人過氧化氫酶(CAT)ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被人過氧化氫酶(CAT)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人過氧化氫酶(CAT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1.     酶標(biāo)儀(450nm

2.     高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.     37恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8

12孔×4

標(biāo)準(zhǔn)品32 ng/mL

0.6mL

0.6mL

按說明書進(jìn)行稀釋

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6mL

3mL

*

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:32168、42、1ng/mL l

試劑的準(zhǔn)備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.  自動洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加*40μL;

4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B50μL,37避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900

2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏:2-8,避光防潮保存。

6.  有效期:6個月

 上海研輝生物科技有限公司是國內(nèi)主要供應(yīng)商之一,公司代理了不同品牌價格檔次的ELISA試劑盒。數(shù)萬種抗體 耗材 試劑等, 品種多,質(zhì)量好,靈敏度高,價格實(shí)惠,可免費(fèi)提供代測服務(wù)(為您節(jié)省時間)咨詢: ,
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