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DNeasy Blood Tissue Kit(250)qiagen試劑盒

從動物血液和組織、細(xì)胞、酵母、細(xì)菌或者病毒中純化總DNA

為各種類型樣本提供標(biāo)準(zhǔn)化的純化方法
即使是特殊類型起始樣本也可以獲得高產(chǎn)量DNA
高品質(zhì)DNA
經(jīng)過優(yōu)化的操作方法適合處理多種起始樣本
可選擇離心柱方式或96孔板高通量方式

DNeasy Blood & Tissue Kit采用基于硅膠膜技術(shù)的離心柱或96孔板方式快速方便的純化DNA。大多數(shù)樣本可直接用蛋白酶K消化處理，無需機械破碎，減少了手動操作時間。為特殊樣本提供優(yōu)化的純化方法，獲得高重復(fù)性、高純度的DNA，用于生物研究、基因型分析和獸醫(yī)病理研究。DNA純化流程可以使用DNeasy Blood & Tissue Kit，在QIAcube全自動核酸純化儀上自動化進(jìn)行。

DNeasy Blood Tissue Kit(250)qiagen試劑盒

DNA產(chǎn)量。

使用DNeasy Blood & Tissue Kit從100 µl全血中純化DNA。羊：從50 µl羊全血中純化DNA。使用超過50 µl的羊血時，DNA產(chǎn)量沒有明顯增加。雞：從5 µl雞全血中純化DNA。鳥類血液中含有核紅細(xì)胞，因此其DNA產(chǎn)量比哺乳動物的高。

DNeasy Mini和96實驗流程。

高效的16重PCR。

使用DNeasy Blood & Tissue Kit從人類K562細(xì)胞中純化基因組DNA。使用QIAGEN Multiplex PCR Kit對圖示量的DNA和16對引物進(jìn)行多重PCR，反應(yīng)平行進(jìn)行兩次。M: 100 bp ladder。

高品質(zhì)DNA。

使用DNeasy Blood & Tissue Kit從圖示的動物樣本中純化DNA，并進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析。對于每個樣本，都對0.5 µg未經(jīng)過酶處理的DN（左側(cè)）、或1 µg經(jīng)過EcoRI處理的DNA（右側(cè)）進(jìn)行了分析。M: lambda-HindIII。

對馬進(jìn)行基因分型。

從三批棕色馬的鬃毛中純化獲得DNA，并使用MSH和ASIP PCR對毛色基因型進(jìn)行分析。[A] MSH PCR產(chǎn)物用TaqI酶處理。馬1和2確定為Ee雜合體，攜帶紅色毛色的隱性等位基因e。[B]對ASIP PCR產(chǎn)物分析得出，馬1和2為Aa雜合體，攜帶黑色毛色的隱性等位基因a。+：黑色馬Ee aa陽性對照。–陰性對照。M：標(biāo)記物。

高通量純化。

使用DNeasy 96 Blood & Tissue Kit從24個小鼠尾和24個大鼠尾樣本中純化DNA。在1%的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行DNA電泳分析。M: lambda-HindIII。

Real-time PCR。

Borrelia sp.是由蜱攜帶的病原體，可導(dǎo)致人類或其他哺乳動物患萊姆病。使用DNeasy Blood & Tissue Kit從蜱中純化DNA。在LightCycler儀器上使用artus Borrelia LC PCR Kit，通過real-time PCR檢測Borrelia DNA。陽性樣本曲線的最di處對應(yīng)每次PCR反應(yīng)5個拷貝DNA。

對豬進(jìn)行基因分型。

使用DNeasy Blood & Tissue Kit從豬耳刻樣本中純化DNA，然后使用Biotype AG公司的Animaltype Pig PCR Amplification Kit和QIAGEN HotStarTaq DNA Polymerase進(jìn)行擴(kuò)增。電泳圖顯示：12個多態(tài)性四核苷酸微衛(wèi)星和一個性別鑒定標(biāo)記物（SBH23）的遺傳指紋圖譜。

性能

高效的DNeasy Blood & Tissue操作流程能夠從動物血液和組織樣本中純化大量的總DNA。優(yōu)化的實驗方案可確保非標(biāo)準(zhǔn)樣本的高產(chǎn)量，如動物毛發(fā)和培養(yǎng)細(xì)胞、固定的組織，或者革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌。獨te的在線實驗方案參考文庫，可從酵母、昆蟲、毛發(fā)和其他類型樣本中純化DNA。

使用DNeasy Blood & Tissue Kits從動物組織中純化的DNA產(chǎn)量
樣本來源	樣本量	DNA（µg）
哺乳動物血液	100 µl	3–6
鳥類血液	5 µl	9–40
HeLa細(xì)胞	2 x 10⁶	15–25
肝臟	25 mg	10–30
腦	25 mg	15–30
腎臟	25 mg	15–30
脾臟	10 mg	5–30
小鼠尾	1.2 cm（尾部）	10–25
大鼠尾	0.6 cm（尾部）	20–40
豬耳	25 mg	10–30
馬毛	10 根毛發(fā)	2–4
魚鰭	20 mg	10–20
魚卵（鯖魚）	10 mg	5–10

DNeasy Blood & Tissue Kits簡化了從多種樣本類型中純化DNA的流程，包括在生命科學(xué)、獸醫(yī)學(xué)和基因分型研究應(yīng)用中常見的動物種類。純化得到的DNA不含PCR抑制劑，能在標(biāo)準(zhǔn)多重real-time PCR中進(jìn)行靈敏的檢測。DNeasy Blood & Tissue Kits確保了可靠的實驗結(jié)果，從轉(zhuǎn)基因小鼠的實驗室分析到家畜的育種項目和種系基因分型研究?？梢杂肈Neasy 96 Blood & Tissue Kit方便地擴(kuò)大常規(guī)的檢測應(yīng)用的規(guī)模。

原理

DNeasy Blood & Tissue Kit適用于從不同的樣本中，包括新鮮或冷凍的動物組織和細(xì)胞、血液或者細(xì)菌，快速純化總DNA（如，基因組、線粒體和病原體等）。

DNeasy膜整合了硅膠膜的結(jié)合特性，經(jīng)簡單顯微離心技術(shù)或者QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System處理即可。在高濃度離液鹽的環(huán)境中，DNA吸附在DNeasy膜上，可以除去溶液中水合分子的水分。DNeasy Blood & Tissue操作流程中設(shè)計的緩沖液條件，旨在使DNA特異性吸附到硅膠膜上，并且優(yōu)化去除污染物和酶抑制劑。

純化過程不需要苯fen或氯仿抽提或乙醇沉淀，僅涉及少量手工步驟。這使得DNeasy Blood & Tissue Kits非常適合同時處理多個樣本。對于高通量的應(yīng)用，DNeasy 96 Blood & Tissue Kit能夠同時處理96或192個樣本。

操作流程

可靠的硅膠膜技術(shù)，利用便捷的離心柱或96孔板形式，確保了快速可重復(fù)的DNA純化，不再需要有機抽提和乙醇沉淀。樣本首先用蛋白酶K裂解。調(diào)整緩沖條件，以提供的DNA結(jié)合條件并將裂解物上樣到DNeasy Mini離心柱或DNeasy 96孔板上。在離心過程中，DNA選擇性地結(jié)合到DNeasy膜上，污染物通過。余下的污染物和酶抑制劑將在兩個高效的洗滌步驟中被去除。然后，用水或緩沖液將DNA洗脫，待用。

DNeasy Mini離心柱預(yù)裝在收集管中，并且單獨封存，確保方便和安全。使用DNeasy Mini離心柱的純化過程可在QIAcube全自動核酸純化儀上自動進(jìn)行。DNeasy 96 Blood & Tissue Kit可使用QIAGEN 96-Well-Plate Centrifugation System以96孔板形式進(jìn)行高通量處理。

應(yīng)用

DNeasy Blood & Tissue Kits提供高品質(zhì)DNA，可直接用于多種下游分析，包括：

生命科學(xué)研究
家畜育種
種系基因分型研究
獸醫(yī)病理分析研究
常規(guī)的應(yīng)用檢測

特點	參數(shù)
Applications	PCR, real-time PCR, genotyping
Elution volume	100–200 µl
Format	96-well plate, spin column
Main sample type	Blood, tissue
Processing	Manual
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein	DNA
Sample amount	100 µl/25 mg
Technology	Silica technology
Time per run or per prep	20 minutes – 1 hour
Yield	6 µg/30 µg