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E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白（E-Cad）免疫組化試劑盒

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產(chǎn)品簡介

“E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)免疫組化試劑盒"相關種屬有：人、大鼠、小鼠、兔等各種種屬，咨詢，我們將竭誠為您服務?。。?！

詳細介紹

產(chǎn)品名稱：E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白（E-Cad）免疫組化試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

免疫組化試劑盒種屬：人、大鼠、小鼠、兔等各種種屬，咨詢

該試劑盒以 HRP 標記的鏈霉親和素復合物（HRP Streptavidin Conjugate，HRP-SA）為基礎，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性E-Cad抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的E-Cad一抗與相應靶抗原結合后，用生物化二抗與一抗特異性結合，zui后加入 HRP-SA，形成抗原—特異一抗—*化二抗—HRP-SA 復合物，顯微鏡下觀察成像。

試劑盒所含試劑：
試劑 A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（選用）
試劑 B 封閉緩沖液（封閉用） 20 mL
試劑 C （*分裝）已稀釋的即用型 REG3 一抗（2.5ml）
試劑 D （*分裝）*化羊抗兔 IgG 1 支
（濃度 1.5 mg/mL，稀釋比為 1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液 20ml
試劑 E HRP-SA 復合物 1 支（濃度 1 μM，稀釋比 1:50~1:200）100 μL
試劑 F DAB 顯色液5ml

E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白（E-Cad）免疫組化試劑盒石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟（建議方案建議方案）：
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片：將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr；
2.脫蠟：切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次10 min；
3.水化：切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min）， 85%乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min；
4.抗原修復：根據(jù)抗體說明書*方法進行抗原修復，常采用高壓、微波（溫度達到 98~100℃）或酶消化修復法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗 2×2min，TBS 洗滌（2×2min）直接進入第 5 步封閉。
5.封閉：滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min；
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉：滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min；
9.加二抗：滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉：滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min；
12.加 HRP-SA：滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37℃濕盒中孵育 30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應用 DAB 溶液（試劑 F）顯色；
15.復染：自來水充分沖洗，復染，脫水，透明；
16.封片：待組織標本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像：顯微鏡下觀察成像。

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