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Con A瓊脂糖凝膠4B,拌刀豆球蛋白瓊脂糖凝膠4B
英文名稱:Con A Sepharose 4B
其他名稱:拌刀豆球蛋白瓊脂糖凝膠4B
級別:BR
Ligand density:10-16mg Con A/ml drained medium
Available capacity:20-45mg porcine thyroglobulin/ml medium
Bead structure:4% agarose
Bead size range:45~165um
Mean bead size:90um
Max linear flow rate:75cm/h at 25℃;HR 16/10 column;5cm bed height
pH stability:long term and working,short term :4~9
Chemical stability:Stable to all commonly used aqueous buffers.Chelating agents such as EDTA, 8 M urea or solutions having a pH below 3 should be avoided as these conditions results in removal of manganese from the lectin with loss of activity as a result
Physical stability:Negligible volume variation due to changes in pH or ionic strength
親和介質(zhì)使用:
1、 裝柱:該介質(zhì)凝膠從4℃冰箱中取出后在室溫下緩慢振搖恢復(fù)到室溫,然后再裝柱,以免產(chǎn)生氣泡影響柱效。
2、 平衡:結(jié)合緩沖液(Binding Buffer)為20mmol/LTris-HCl緩沖液,pH7.4,其中含1mM MnCl2,1mM CaCl2,0.15M NaCl。由于介質(zhì)保存液含有20%乙醇,因此裝好柱的介質(zhì)必須進行平衡。平衡介質(zhì)所需的液體約為10個柱床體積。由于凝集素和糖基結(jié)合強度弱,為促進糖基結(jié)合,清洗緩沖液中可以不含有0.15M NaCl。
3、 吸附:預(yù)分離組分經(jīng)過結(jié)合緩沖液透析后進行上柱吸附。
4、 清洗:待預(yù)分離組分已經(jīng)都進入介質(zhì)中后,加入清洗液體,洗去非特異吸附蛋白,大約5-10倍柱體積。
5、 洗脫:可以用0.1-0.5M糖類進行線性或梯度洗脫,例如用α-甲基-D-甘露糖苷(α-D-methylmannoside),或α-甲基-D-葡萄糖苷(α-D-methylglucoside),緩沖液為20mmol/L Tris-HCl緩沖液,pH7.4,并含有0.15M NaCl。強結(jié)合組分可以采用低pH值(但不得低于pH3)緩沖液 ,即用0.1M,pH6.5的硼酸緩沖液進行洗脫。
親和介質(zhì)再生:
ConA 瓊脂糖凝膠的再生處理方法:每次采用2-3倍體積、含0.5M/L NaCL、高pH(8.5)值和低pH(4.5)緩沖液交替清洗柱子,交替3次。再用3-5倍體積的清洗緩沖液清洗。高pH值緩沖液可以采用0.1MTris-HCL,低pH值緩沖液可以采用0.1M檸檬酸緩沖液。洗脫強力結(jié)合的組分,可以采用20-50%乙醇線性洗脫
性狀:含20%乙醇,底部為乳白色膠體
用途:生化研究。Con A 瓊脂糖凝膠用于各種含*及葡萄糖殘基的糖、糖蛋白、糖脂等物質(zhì)的分離純化
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