1. 石蠟切片在染色過程中出現(xiàn)脫片現(xiàn)象？

一般來說，如果用多聚賴氨酸包被過的片子做正常免疫組織化學(xué)染色的話是不會掉片子的。但如果要做抗原修復(fù)的話，如果片子處理不好的話是有可能掉片子的。可以試試一下的方法：

a.我們一般用APES：丙酮=1:50的處理液來處理片子，處理5min左右，然后水洗，烘干既可用于貼片。如果把水滴再處理好的片子上，水比較聚的話說明片子處理的好。

b.貼片子的時候，展片的時間要把握好，不要太長，否則不利于貼牢。

c.烤片子也很重要，切好的片子zui先不要馬上收起來，而是水平至于烘片臺上37度兩個小時以上，一是水分*烘干。然后做染色前zui再在60度烘箱烘1個小時。

d.再補充一點 ，石蠟包埋時，酒精梯度脫水以及浸蠟等一點要充分，這對貼片也有影響。

2. DAB顯色后發(fā)現(xiàn)切片著色不均勻：如一片著色，一片不著色或染色淺？

著色不均勻可能與你的實驗手法有很大關(guān)系，可能原因有：

a.切出的片子厚度本身可能就不一樣，切出一片厚，一片薄，這樣可能造成著色深淺不一。

b.有可能是顯色液底物加到片子上后沒有搖勻，造成局部底物濃度不一致，所以加完顯色液后zui將片子來回左右晃動幾下，使片子上所有區(qū)域的底物濃度一致。

c.如果你的片子是中間的染色深，靠近邊上的淺，那有可能是你蠟圈畫的太小，顯色液覆蓋的面積不過大而產(chǎn)生了邊緣效應(yīng)。zui外側(cè)的組織片zui離顯色液外緣0.5cm。

3. 免疫組化結(jié)果老是出現(xiàn)陰性結(jié)果？

免疫組化出現(xiàn)陰性結(jié)果有可能組織本身就沒有信號，也有可能是抗體出了問題。你可以找一些陽性組織做一下，以確定是抗體的問題還是組織本身就沒有所檢測的抗原表達。還有，你可以提高抗體的濃度，或者試一試抗原修復(fù)等方法，也許會得到意想不到的結(jié)果。

4. 切片染色后背景太深，不易區(qū)分特異性與非特異性著色？

a.也許是抗體本身有問題，因為有很多公司的抗體質(zhì)量并不好，很容易上背景，可以換一種抗體 試試。

b.如果經(jīng)費不允許換抗體的話，你可降低抗體的濃度，并隨時注意觀察顯色，在能看到信號的情況下盡量降低背景。

c.可以換一種封閉液，不同的封閉液對某種來源的抗體來說，會有不同的封閉效果。

d.可以在一抗和二抗中加入一定比例的你所檢測動物組織的正常血清，這樣可以去除一部分非特異性染色。

5. 有人在一抗孵育前用tritonX100來通透細胞，對石蠟切片需要否？
用石蠟切片做免疫組化是不需要透膜處理的，一是因為石蠟切片比較薄，另外一個原因是在包埋過程中細胞膜已經(jīng)被破壞，所以這一步可以省略。

6. 蘇木素復(fù)染的時間應(yīng)該是多少？復(fù)染過度咋辦？

復(fù)染時間不需要太長，當然這也要根據(jù)蘇木精的質(zhì)量來確定，但基本上不要超多一分鐘。染色過深的話可以用酸性的水溶液（在水里滴加少量濃鹽酸）分色，分色的另外一個目的是洗掉蘇木精在細胞質(zhì)中的非特異性結(jié)合，這樣可以使細胞質(zhì)中的特異信號更明顯。所以不管復(fù)染是不是過度，分色這一步zui不要省掉。分色后記得再用氨水返藍一下。

7. 抗原修復(fù)應(yīng)在滅活POD之前還是之后？

熱修復(fù)后不需要滅活POD