兔子免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
上海裕臣生物科技有限公司代理進口原裝\進口分裝ELISA試劑盒,具體指標齊全,品種多,質(zhì)量好,靈敏度高。
標本的采集及保存
1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
3. 其它生物標本:請1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?/span>-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。
4. 樣本處理:血清或血漿標本*稀釋5,000倍。
注:以上標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
注:
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài);同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請精確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數(shù)。
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
洗板方法
1. 手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。
2. 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算
以標準物的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),OD值為橫坐標(對數(shù)坐標),在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,如curve expert 1.3,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
◇ 注意事項:
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類標本需添加*。