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谷研試劑-標(biāo)準(zhǔn)品的制備
.標(biāo)準(zhǔn)品的制備:標(biāo)準(zhǔn)品的制備是非常復(fù)雜的問題,也是標(biāo)記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標(biāo)準(zhǔn)品(或商品化試劑中標(biāo)準(zhǔn)品)的制備。
)基質(zhì)的制備:如前所述,作為標(biāo)準(zhǔn)品的介質(zhì)(基質(zhì))成分應(yīng)與被測樣品相同。對大多數(shù)用于測定血清中某物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品,應(yīng)用不含
被測物質(zhì)的零血清制備,以求反應(yīng)的介質(zhì)環(huán)境相當(dāng)。但有時零值血清的制備十分困難,所以有些標(biāo)準(zhǔn)品用適當(dāng)?shù)木彌_液制備,并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用%~2%的牛血清白蛋白),以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近。
零值血清的制備方法有:
()吸附法:血清中小分子物質(zhì)如三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)等,可用活性炭吸附去除。這種方法簡便,但待測物質(zhì)難以清除干凈,而且大分子活性物質(zhì)不能用此法進(jìn)行制備。
(2)反復(fù)凍融法:對大分子活性物質(zhì)可選用低值血清,經(jīng)反復(fù)凍融使被測物質(zhì)失活。用這種方法可使某些蛋白類激素大部分失活,但也難以得到真正的零值血清。
(3)親和層析法:用特異性抗體制備親和層析柱,用以吸附被測抗原。用這種方法可以得到高質(zhì)量的零值血清,但本法比較復(fù)雜而且成本也高。
2)標(biāo)準(zhǔn)物純品的選擇:應(yīng)選擇高化學(xué)純和高免疫純的純品作標(biāo)準(zhǔn)品。其中免疫純尤為重要,在標(biāo)準(zhǔn)品中不應(yīng)含有與被測物質(zhì)有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。
3)標(biāo)準(zhǔn)品的制備:先用零值血清配置高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,然后根據(jù)實驗系統(tǒng)的要求,用零值血清將高值血清稀釋至應(yīng)有的濃度,制成符合預(yù)定要求的,由不同濃度組成的系列標(biāo)準(zhǔn)品。2.標(biāo)準(zhǔn)品的鑒定
)免疫活性的鑒定:選用高特異性的抗血清分別作*標(biāo)準(zhǔn)品(如WHO的參考品或國家標(biāo)準(zhǔn)品)的待鑒定標(biāo)準(zhǔn)品的劑量反應(yīng)曲線,并觀察兩條曲線的平行性。如兩條劑量反應(yīng)曲線平行,說明兩種物質(zhì)對同一抗體有相同的親和力,即二者是同質(zhì)性物質(zhì)。如兩條劑量反應(yīng)曲線不平行,說明兩種物質(zhì)具有異質(zhì)性,因而這一待鑒定的標(biāo)準(zhǔn)品是不能使用的。
2)濃度的標(biāo)定:用已鑒定過的,免疫活性合格的標(biāo)準(zhǔn)品,與*的標(biāo)準(zhǔn)品作濃度相同的劑量反應(yīng)曲線。此時,兩條劑量反應(yīng)曲線應(yīng)該是基本重合的。如果兩者平行但不重合,則取兩條劑量反應(yīng)曲線的50%結(jié)合處的相應(yīng)劑量( ED50 )計算二者的換算系數(shù),然后調(diào)整待鑒定標(biāo)準(zhǔn)品的濃度,直至使兩條劑量反應(yīng)曲線*或基本重合為止。
3.標(biāo)準(zhǔn)品的計量:許多小分子抗原或半抗原已能得到純品或進(jìn)行合成,它們對作為標(biāo)準(zhǔn)品的要求可以得到基本的滿足,其計量多直接用單位體積中的重量表示,如mg / ml、ng / ml 、pg / ml等。zui近WHO用質(zhì)量單位取代重量單位,即mol / L、mmol / L、或nmol / L等。對大分子的活性物質(zhì)則比較復(fù)雜。由于得不到的純品,故很難直接用單位體積中的重量或單位體積中的質(zhì)量計量。因此,常用該物質(zhì)的生物活性單位表示,如IU / L、mIU / L等。
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