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人蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒的基本原則有三:
()抗原或抗體的物理吸附到固相載體,可以是蛋白質(zhì)與聚苯乙烯表面吸附的疏水性部分之間的相互作用,并人蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒保持其免疫活性;
(2)抗原或抗體酶結(jié)合物可以通過然而人蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒酶共價(jià)鍵連接,這種酶結(jié)合物仍能保持其免疫和大鼠ELISA試劑盒酶的活性;
(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)的抗原或抗體試劑盒,以確定是否免疫反應(yīng)是根據(jù)底物顯色反應(yīng)的增加,和顯色反應(yīng)深度成正比樣品的相應(yīng)抗原或抗體的量,因此,可以按顯色底物水平顯示測(cè)試結(jié)果。
人蛋白ELISA檢測(cè)試劑盒間接法
() 抗原包被:用包被液將PEDV抗原作∶5稀釋包被反應(yīng)板,每孔00μl,同時(shí)設(shè)陰性細(xì)胞培養(yǎng)物對(duì)照孔,置4℃過夜。
(2) 洗滌:用洗滌液洗滌2次,每次2min,瀝干。
(3) 加入被檢血清:用保溫液將被檢血清作∶00稀釋,加入反應(yīng)板相鄰的兩個(gè)孔中,每孔00μl。同時(shí)作陰、陽性標(biāo)準(zhǔn)血清對(duì)照,置37℃孵育h。
(4) 洗滌3次:方法同上。
(5) 加入酶結(jié)合物:用保溫液將酶結(jié)合物作∶4 000稀釋,加入反應(yīng)孔中,每孔00μl,置37℃孵育h。
(6) 洗滌3次:方法同上。
(7) 加入底物:每孔00μl,置室溫暗盒內(nèi)顯色20min。
(8) 加入終止液:每孔50μl,靜置5min。
(9) 測(cè)定OD值:用檢測(cè)儀,于492nm波長(zhǎng),按儀器使用及制定標(biāo)準(zhǔn)要求調(diào)節(jié)儀器,測(cè)定各反應(yīng)孔的OD值,記錄結(jié)果。
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