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兔子催乳素 ELISA試劑盒測定結(jié)果判定:
結(jié)果判定一般是根據(jù)比色結(jié)果和肉眼觀察綜合判定。如在判定過程發(fā)現(xiàn)有些反應孔出現(xiàn)倒陰不陽的現(xiàn)象或出現(xiàn)不常見的模式(如乙肝兩對半中出現(xiàn)2陽性等),需本著嚴謹?shù)膽B(tài)度,重新復查。
對ELISA測定中出現(xiàn)問題的可能原因(非試劑盒本身的原因),總結(jié)如下: )弱陽性質(zhì)控樣本檢測不出溫育的時間或溫度不夠;顯色反應時間太短;所用配制緩沖液的蒸餾水有問題。
2)測定的重復性差 ,這是由于測定操作引起的問題,包括 ①加樣本及試劑量不準;孔間不一致 ②加樣過快,孔間發(fā)生污染 ③加錯樣本 ④加樣本及試劑時,加在孔壁 ⑤不同批號試劑盒中組分混用 ⑥溫育時間、洗板、顯色時間不一致 ⑦孔內(nèi)污染雜物,血清標本未*凝固即加入,反應孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血細胞,易出現(xiàn)假陽性等。 3)全部孔都不顯色 ① 漏加酶結(jié)合物; ② 洗板液配制中出現(xiàn)問題 ③ 漏加顯色劑A或B ④ 終止劑當顯色劑使用 4)全部板孔均有顯色 ① 板不干凈 ② 顯色液變質(zhì) ③ 洗板液受酶等污染
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
計算以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
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