人鱗狀細胞癌相關抗原（SCC-Ag）ELISA試劑盒說明

本試劑僅供研究使用      標本：血清或血漿

試驗原理：
人鱗狀細胞癌相關抗原SCC-Ag試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知SCC-Ag濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將SCC-Ag和標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中SCC-Ag的濃度呈比例關系。

試劑盒內容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存）    96孔配置    48孔配置    配制
96/48人份酶標板    塊板（96T）    半塊板（48T）    即用型
塑料膜板蓋    塊    半塊    即用型
標準品：6ug/L    瓶（0.6ml）    瓶（0.3ml）    按說明書進行稀稀
空白對照    瓶（.0ml）    瓶（0.5ml）    即用型
標準品稀釋緩沖液    瓶（5ml）    瓶（2.5ml）    即用型
標記的抗SCC-Ag抗體    瓶（6ml）    瓶（3.0ml）    即用型
親和鏈酶素-HRP    瓶（0ml）    瓶（5.0ml）    即用型
洗滌緩沖液    瓶（20ml）    瓶（0ml）    按說明書進行稀釋
底物A    瓶（6.0ml）    瓶（3.0ml）    即用型
底物B    瓶（6.0ml）    瓶（3.0ml）    即用型
終止液    瓶（6.0ml）    瓶（3.0ml）    即用型
標本稀釋液    瓶（2ml）    瓶（6.0ml）    即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
人鱗狀細胞癌相關抗原SCC-Ag避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，000×g離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。000×g離心30分鐘去除顆粒。
細胞上清液---000×g離心0分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。000×g離心0分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準備
標準品：人鱗狀細胞癌相關抗原SCC-Ag標準品的系列稀釋應在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
6 ug/L    （6號標準品）    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
8.0 ug/L    （5號標準品）    00ul的原倍標準品加入00ul的標準品稀釋液
4.0 ug/L    （4號標準品）    00ul的5號標準品加入00ul的標準品稀釋液
2.0 ug/L    （3號標準品）    00ul的4號標準品加入00ul的標準品稀釋液
.0 ug/L    （2號標準品）    00ul的3號標準品加入00ul的標準品稀釋液
0.5 ug/L    （號標準品）    00ul的2號標準品加入00ul的標準品稀釋液
0 ug/L    （空白對照）    原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液：稀釋后加入50ul于反應孔內。
加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育小時。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育0分鐘。避免光照。
取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

局限
6號標準品以上的結果為非線性的，根據此標準曲線無法得到的結果。

人鱗狀細胞癌相關抗原SCC-Ag試劑盒性能
. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應。
3. 重復性：板內、板間變異系數均小于0%。

結 果 判 斷 與 分 析
、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應的SCC-Ag標準品濃度為橫坐標（X），做得相應的曲線，樣品的SCC-Ag含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍：0-6ug/L

4、敏感度： 0.0 ug/L