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血管位蛋白樣/血管生成素樣蛋白-抗體 樣本的物種 應選擇物種相同或有交叉反應的抗體,抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應,因其氨基酸序列同源性較高,如果樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應種屬表中,并不意味著該抗體不適用于檢測該物種的蛋白,而只是表示該物種尚未用此抗體檢測驗證過,應通過序列比對的方法來預測交叉反應,可應用Expasy 和 NCBI BLAST 來進行不同物種蛋白同源性比對。
血管位蛋白樣/血管生成素樣蛋白-抗體一抗宿主物種的選擇一般說來,在使用偶聯(lián)二抗結合無偶聯(lián)物的一抗時,一抗宿主動物的物種選擇較為重要,對于免疫組化而言,盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗,從而避免二抗與樣本內源性免疫球蛋白產生交叉反應,例如:檢測小鼠樣本蛋白,則不應選擇小鼠或大鼠源的一抗,選兔源的一抗,則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子(酶、熒光素、等)的抗兔IgG。
如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況,除免疫組化外的其它對不含內源性免疫球蛋白樣本的檢測方法,則抗體宿主物種的影響不大,如對不含IgG 的細胞裂解物樣本的western blotting檢測,盡管如此,含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白,還原變性樣本中含IgG,在western blot 檢測中則結合出現(xiàn)IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。
二抗的選擇 二抗應選用與使用的一抗相同的物種來源,例如:如果你的一抗是小鼠的單克隆抗體,二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建議檢查二抗說明書確保該抗體適用于你的檢測應用, 二抗一般連接熒光素FITC 或發(fā)光團。
上海谷研生物科技有限公司特殊抗體的保存條件:
. 酶聯(lián)抗體:永遠保存在4 度,避免凍起來。否則會導致酶活性的下降或者喪失
2. 偶聯(lián)抗體:所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體,對
光極為敏感,因此在所有的實驗階段也是要避光操作的!
3. IgG3 的同型對照:永遠保存在4 度,避免凍起來。因為如果出現(xiàn)凍融過程,該抗體非常
容易形成多聚體無論是保存還是運輸,避免反復凍融!
反復凍融會導致抗體變性,導致多聚體形成,從而降低抗體的結合能力!
抗體保存其它相關信息:
YS-900B Anti-Trk B(Tyrosine kinase,Pyk2)??激酶B抗體(神經生長因子受體的一種)
YS-90B Anti-Trk B(Tyrosine kinase,TrkB)??激酶B抗體(神經生長因子受體的一種)
YS-902B Anti-Trk C(Tyrosine kinase,TrkC)??激酶C抗體(神經生長因子受體的一種)
YS-903B Anti-Trop-2??Trop-2抗體
YS-904B Anti-TSARG3(Testis and spermatogenesis related gene 3)??生精細胞凋亡相關基因3抗體
YS-905B Anti-TSARG4(Testis and spermatogenesis related gene 4)??生精細胞凋亡相關基因4抗體
YS-906B Anti-TSGF(Tumor Specific Growth Fanctor)??惡性腫瘤特異性生長因子抗體
YS-907B Anti-TSH(Mouse Anti-Human Thyroid stimulating hormone Monoclonal Antibody)??鼠抗人促甲狀腺素單克隆抗體
YS-908B Anti-TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)??促甲狀腺素受體抗體
YS-909B Anti-TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(CT)??促甲狀腺素受體抗體(C端)
YS-90B Anti-TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT)??促甲狀腺素受體抗體(N端)
YS-9B Anti-TSLC (tumor suppressor in lung cancer-)??肺癌腫瘤阻抑基因抗體
YS-92B Anti-TSLP(Thymic stromal lymphopoietin isoform )??淋巴細胞生成素-抗體
關于加入甘油保存:有些人會加50%的甘油到抗體中來避免反復凍融,甘油在-20 度 會降低冰點。這對很多抗體可能是可行的。但是abcam 僅對非常小的一部分抗體檢測過其在這種條件下的穩(wěn)定性;而abcam 只對按照條件保存的抗體提供質量保證!加入甘油的溶液不建議在-80 度保存,因為這已經超過了甘油的冰點。如果您要加入甘油來保存抗體的話,請謹慎注意無菌操作,避免污染!
關于蛋白保護劑:
蛋白在高濃度時更不容易降解( mg/ml 或者更高),這就是為什么在抗體中加入BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因為這些穩(wěn)定劑會和抗體一起競爭結合標記物。
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