黑色素瘤細胞人胚膀胱組織來源細胞在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期.此時，細胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形.然后細胞貼附于載體表面，稱貼壁，懸浮期結(jié)束. 細胞貼壁速度與細胞種類，培養(yǎng)基成分，載體的理化性質(zhì)等密切相關(guān)。一般情況下，原代培養(yǎng)細胞貼壁速度慢，可達0-24 小時或更多,而傳代細胞系貼壁速度快，通常0-30 分鐘即可貼壁。細胞貼壁后還需經(jīng)過一個潛伏階段，才進入生長和增殖期.原代培養(yǎng)細胞潛伏期，約24-96 小時或更長，連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期短，僅需6-24 小時。
細胞指數(shù)增生期（logarithmic growth phase） 這是細胞增殖zui旺盛的階段，分裂相細胞增多。指數(shù)增生期細胞分裂相數(shù)量可作為判定細胞生長是否旺盛的一個重要標志。通常以細胞分裂相指數(shù)（Mitotic index,MI）表示，即細胞群中每000 個細胞中的分裂相數(shù)。一般細胞的分裂指數(shù)介于0.%-0.5%，原 代細胞分裂指數(shù)較低，而連續(xù)細胞和腫瘤細胞分裂相指數(shù)可高達3%－5%。黑色素瘤細胞指數(shù)增生期的細胞是細胞活力時期，是進行各種實驗*時期，也是凍存細胞的時機。在接種細胞數(shù)量適宜情況下，指數(shù)增生期持續(xù)3－5 天后，隨著細胞數(shù)量不斷增多、生長空間減少，zui后細胞相互接觸匯合成片。

 正常細胞相互接觸后能抑制細胞運動，這種現(xiàn)象稱接觸抑制現(xiàn)象（contact inhibition）。而惡性腫瘤細胞無接觸抑制現(xiàn)象，能繼續(xù)移動和增殖，導(dǎo)致細胞向三維空間擴展，使細胞發(fā)生堆積（piled up）。細胞接觸匯合成片后，雖然發(fā)生接觸抑制，但只要營養(yǎng)充分，細胞仍能進行增殖分裂，因此細胞數(shù)仍然在增多。但是，當細胞密度進一步增大，培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少，代謝產(chǎn)物增多時，細胞因營養(yǎng)枯竭和代謝產(chǎn)物的影響，導(dǎo)致細胞分裂停止，這種現(xiàn)象稱密度抑制現(xiàn)象（Density Inhibition）。

 培養(yǎng)細胞注意事項:

    實驗進行前，無菌室及無菌操作臺（laminarflow）以紫外燈照射30-60分鐘滅菌，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面，并開啟無菌操作臺風扇運轉(zhuǎn)0分鐘后，才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后，將實驗物品帶出工作臺，以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)0分鐘以上后，再進行下一個細胞株之操作。

     無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置，其它實驗用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在抬面之無菌區(qū)域，勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。

小心取用無菌之實驗物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當?shù)燃壷疅o菌操作臺（至少ClassⅡ）。操作過程中，應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO及TPA等，并避免尖銳針頭之傷害等。
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芐基三乙基lv"化銨，lv"化芐基三乙銨，三乙基芐基lv"化銨，BTEAC，TEBAC
磷suan"銨，Ammonium alcohol polyvinyl phosphate
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三乙烯二胺，三乙撐二胺，,4-二氮雜二環(huán)[..]辛烷，,4-乙烯哌嗪，三亞乙基二胺，環(huán)三乙二胺，，4-二疊氮雙環(huán)辛烷，TEDA，TED