羊抗人血清抗體*,羊抗人血清抗體用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，WB實(shí)驗(yàn)，相應(yīng)的標(biāo)記抗體有HRP標(biāo)記抗體，F(xiàn)ITC標(biāo)記，BIO等。

【貯存條件】： 貯存于-20℃. 本品應(yīng)在低溫下保存，長(zhǎng)時(shí)間在暴露在空氣中，含量會(huì)有所降低。

規(guī)格：0.5ml

材料和方法

　　. 材料 人成骨肉瘤MG63細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室保存。重組質(zhì)粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王巖教授惠贈(zèng)。脂質(zhì)體 2000( Invitrogen公司)。高糖DMEM培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco 公司)，胎牛血清(Hyclone公司)，*和EDTA(Sigma 公司)。A2387，KN93，CaM，重組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain，Calbiochem)?？贵w：Myc (9E0;Roche)，HA (3F0;Roche)，Pcofilin，Cofilin(Santa Cruz)， CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.)，PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒(邁晨科技有限公司)。

　　.2 蛋白印跡實(shí)驗(yàn) MG63細(xì)胞鋪于35 mmol/L培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞密度達(dá)到60%～70%時(shí)，轉(zhuǎn)染MycSSHL，48 h后換無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)3 h，分別加入濃度為0.5，，2.5，5 μmol/L的A2387孵育0 min后裂解細(xì)胞，離心取上清加入凝膠加樣緩沖液,沸水浴上加熱5 min，上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交〔一抗分別為Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯色。

　　.3 體外激酶測(cè)定 MycSSHL(WT)及其突變體MycSSHL(2 SA)分別轉(zhuǎn)染至MG63細(xì)胞，48 h后采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對(duì)照組為抗IgG抗體?；厥誐ycSSHL，加入0.6 μg/ml重組活性CaMKⅡ(單獨(dú)或同時(shí)加入抑制劑KN93)以及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 于 20 μl 激酶反應(yīng)緩沖液中，30℃反應(yīng)40 min。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜，應(yīng)用放射自顯影技術(shù)檢測(cè)32P 標(biāo)記的SSHL水平。

　　.4 體外SSHL磷酸酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn) MycSSHL(WT)或MycSSHL (2 SA)轉(zhuǎn)染至MG63細(xì)胞，48 h后，采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對(duì)照組為抗IgG抗體。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨(dú)或同時(shí)加入抑制劑KN93)，20 μg/ml CaM，以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 于 20 μl 反應(yīng)緩沖液(50 mol/L HEPES，pH 7.4，0. mol/L CaCl2，0.5 mol/L EDTA，3 mol/L MgCl2，00 mmol/L NaCl， mol/L dithiothreitol，0.5 mg/ml BSA， μg/ml leupeptin),中30℃反應(yīng)2 h。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交(一抗分別為Pcofilin，Cofilin， cmyc 抗體)、ECL顯色。

本公司更多產(chǎn)品優(yōu)惠:

雷帕霉素靶蛋白    兔子免疫球蛋白GIgG抗體 
末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)    兔子免疫球蛋白EIgE抗體
前列腺特異抗原    兔子免疫球蛋白AIgA抗體 
前列腺特異性抗原(PSA)單克隆抗體    兔子可溶性粘附分子Sam抗體
熱休克蛋白27    兔子可溶性血管細(xì)胞粘附分子sVCAM-抗體
人波形蛋白(Vimentin)    兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體sEPCR抗體
人-S-轉(zhuǎn)移酶-π(GST-π)    兔子可溶性細(xì)胞間粘附分子sICAM-抗體
人結(jié)蛋白(Desmin)    兔子可溶性P選擇素sP-selectin抗體
人絨毛蛋白(Villin)    兔子可溶性E選擇素sE-selectin抗體
絨毛膜*β亞基(β-hCG)    兔子可溶性CD40配體sCD40L抗體
乳頭瘤病毒 廣譜(HPV-,6,,6-6,8,3)    兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體ANGA抗體
上皮抗原    兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白5MIP-5抗體
上皮膜抗原(EMA)    兔子巨噬細(xì)胞炎性蛋白αMIP-α/CCL3抗體
神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)    兔子膠原酶IICollagenase II抗體
嗜鉻素 A(Chromogranin A)    兔子膠原酶ICollagenase I抗體 
嗜鉻素A    兔子堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF抗體 
胎盤(pán)堿性磷酸酶    兔子甲狀腺素T4抗體
胎盤(pán)堿性磷酸酶(PLAP)    兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子TIMP-抗體