產(chǎn)品名稱
通用名稱：三聚氰胺檢測試劑盒
英文名稱：ELISA Kit to Detect Melamine
產(chǎn)品編號：TH056-1
概要
三聚氰胺是一種化工原料，主要用于涂料、塑料、肥料和清潔產(chǎn)品等。不法商販為了提高蛋白質(zhì)含量，常將三聚氰胺添加在牛奶及奶制品中。三聚氰胺在食品中危害*，可導致嬰兒腎結(jié)石和腎功能衰竭。三聚氰胺酶聯(lián)免疫試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點，適用于現(xiàn)場大批量樣品檢測。
包裝規(guī)格
96T/盒
預(yù)期用途
可定性、定量檢測牛奶、奶粉及飼料等樣本中的三聚氰胺的殘留量。
測定原理
樣品中游離的三聚氰胺與酶標板上固定的三聚氰胺抗原特異性競爭抗體，酶標二抗可與抗體反應(yīng)，然后洗掉游離的酶標二抗和抗體，再通過被固定的酶催化顯色劑顯色，根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中三聚氰胺的含量。根據(jù)競爭性原理，如果樣品中的游離三聚氰胺量少，則酶標二抗結(jié)合多，顯色深，反之，則顯色淺。
產(chǎn)品組成
1、三聚氰胺酶標板：96孔
2、三聚氰胺標準品：6瓶（1ml/瓶）,含量分別是：
0ppb，1 ppb，3ppb，9ppb，27ppb，81ppb
3、三聚氰胺高濃度標準品（添加回收實驗）：10ppm
4、三聚氰胺抗體工作液：1瓶（7ml）， 直接使用
5、三聚氰胺酶標二抗：1瓶（13ml），直接使用
6、三聚氰胺底物液A：1瓶（7ml），過氧化脲
7、三聚氰胺底物液B：1瓶（7ml），四甲基聯(lián)苯胺
8、三聚氰胺終止液：1瓶（7ml），2M硫酸
9、10×濃縮洗滌液：1瓶（50ml），用于洗板
10、說明書一份
11、質(zhì)檢報告一份
12、蓋板膜一張
使用單位需自備的設(shè)備及試劑
設(shè)備：
┅┅微孔板酶標儀
┅┅均質(zhì)器
┅┅振蕩器
┅┅離心機
┅┅天平，精度0.01g
┅┅微量移液器：單道20μl ~200μl、100μl~1000μl
多道50μl~300μl
試劑：
┅┅去離子水
溶液配制
1×洗滌工作液：
取50ml 10×濃縮洗滌液，加去離子水450ml，混勻?？稍?-8℃保存三個月。
待測樣品處理方法
1、液態(tài)奶（稀釋系數(shù)20）
1) 取液態(tài)奶50μl于潔凈離心管中，加入950μl去離子水，充分混勻，
2) 室溫4000g離心5min，去除上層脂肪層（脫脂或低脂奶此步可?。?；
3) 取50μl用于檢測。
2、奶粉、飼料（稀釋系數(shù)200）
1) 稱取1±0.05g樣品（飼料需粉碎）于50ml離心管中，加入10ml去離子水充分混勻；
2) 取50μl加入950μl去離子水，再次充分混勻；
3) 室溫4000g離心5min；
4) 取50μl上清用于檢測。
注意事項
1) 使用前將試劑盒回升至室溫（20-25℃）。
2) 嚴格按說明書操作，不得改變加樣順序及溫育時間，
每加一種試劑前需將其搖勻。
3) 盡量縮短加樣時間，加入相同試劑或樣品時應(yīng)使用多道微量移液器。
4) 洗板應(yīng)保持*性，不可更改沖洗次數(shù)。洗滌后，避免微孔干燥，否則可能會造成標準曲線不成線性或重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
5) 若底物液B有任何顏色表明其變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑盒可能變質(zhì)。
6) 若酶標板底部被污染，則在讀數(shù)之前用軟紙輕輕擦試微孔板底部，防止因污染而影響讀數(shù)結(jié)果。
7) 在所有恒溫孵育過程中，要避免光線照射，應(yīng)用蓋板膜蓋住微孔板。
8) 沒有用完的微孔板應(yīng)存放回有干燥劑的密封袋內(nèi)，2-8℃密封干燥保存，試劑盒避免冷凍。
9) 不要使用過期的試劑盒及各組份，不要同時使用不同批號試劑盒中的試劑。
酶免分析步驟
1、將標準品和樣品對應(yīng)的微孔編號，每個標準品和樣品做雙孔平行，并記錄標準品和樣品的位置。
2、在標準品孔中加入50l各標準品溶液，在各樣品孔中加入50l樣品溶液。
3、在所有孔中加入50l的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。
4、小心揭開蓋板膜，甩干孔中液體，用稀釋好的洗滌液（250μl/孔）充分洗滌微孔板3次，在吸水紙上拍干（拍干后未清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
5、在所有孔中加入100l的酶標二抗，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。取出酶標板，按步驟4洗板5次。
6、洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50l底物液A，再加 50l底物液B，輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻，25℃環(huán)境避光顯色15分鐘 (在顏色淺的情況下可適當延長反應(yīng)時間，但總顯色時間不要超過30分鐘)。
7、每孔中加入50l終止液，輕輕晃動使之*混勻，在450nm（建議使用雙波長450/630nm）下檢測吸光度，結(jié)果在5分鐘內(nèi)讀取。
結(jié)果計算
1、所獲得的標準溶液和樣本的每個濃度吸光度值的平均值（B）除以*個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以*,即百分吸光度值。
2、以三聚氰胺濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標,即為三聚氰胺濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中三聚氰胺濃度C（ng/ml）。樣本經(jīng)過稀釋時應(yīng)乘以相應(yīng)稀釋系數(shù)。
樣品檢測下限
本試劑盒的zui低檢測靈敏度是1ppb(1ng/ml、1μg/l或1μg/kg)。
交叉反應(yīng)(特異性)
三聚氰胺……………………………………*
樣品zui低檢測限
液態(tài)奶………………………………………20ppb
奶粉、飼料…………………………………200ppb
準確度（回收率）
液態(tài)奶………………………………………95±15％
奶粉、飼料…………………………………95±15％
精密度
試劑盒板內(nèi)變異系數(shù)小于8%，板間變異系數(shù)小于15%。
貯藏條件及保存期
產(chǎn)品保存于2-8℃，自生產(chǎn)日期起12個月內(nèi)有效。
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