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植物過氧化物酶(POD)ELISA試劑盒使用說明

時間:2013/4/25閱讀:374
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植物過氧化物酶(POD)ELISA試劑盒僅供研究使用,用于測定植物組織,細胞及相關液體樣本中過氧化物酶(POD)的活性。
 植物過氧化物酶(POD)ELISA試劑盒實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中過氧化物酶(POD)水平。用純化的過氧化物酶(POD)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶(POD),再與HRP標記的過氧化物酶(POD)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶(POD)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中過氧化物酶(POD)濃度。

植物過氧化物酶(POD)ELISA試劑盒樣本處理及要求:
1. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
3. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
4. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

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