蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本的使用說明書
實驗原理
蛙或蟾蜍等兩棲類動物的一些基本生命活動和生理功能與溫血動物相似，而其離體組織生活條件易于掌握，在任氏液的浸潤下，神經(jīng)肌肉標(biāo)本可較長時間保持生理活性，因此，在生理學(xué)實驗中常用蛙或蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸肌離體標(biāo)本來觀察神經(jīng)肌肉的興奮性、興奮過程以及骨骼肌收縮特點等。
實驗設(shè)備
蛙類手術(shù)器械和藥品1套，包括：蛙板、小玻板各1塊，粗剪刀、直剪刀各1把，大鑷子、小鑷子各1把，*1把、探針1根、玻璃分針2根，大燒杯、小燒杯各1個，滴管1支，培養(yǎng)皿1個，棉線，任氏液，鋅銅叉。
實驗步驟
1. 破壞腦脊髓：取蟾蜍一只，用自來水沖洗干凈。左手握住蟾蜍，用食指壓住頭部前端使頭前俯，右手持刺蛙針從枕骨大孔向前刺入顱腔，左右攪動搗毀腦組織，然后將刺蛙針退到枕骨大孔，不拔出而是將其尖轉(zhuǎn)向后插入脊柱管中搗毀脊髓，插入椎管時，蟾蜍后肢立即失去緊張性，多數(shù)情況出現(xiàn)尿失禁。若腦脊髓破壞*，可見蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。
2. 剪除上肢和內(nèi)臟：在骶髂關(guān)節(jié)上0.5～1.0cm處用粗剪刀剪斷脊柱。用鑷子夾住后端脊柱，以剪刀沿脊柱兩側(cè)剪除所有內(nèi)臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、后端脊柱及緊貼于脊柱兩側(cè)的坐骨神經(jīng)。
3. 剝皮：左手用鑷子或直接用手捏住脊柱斷端（注意不要壓迫神經(jīng)），右手捏住斷端邊緣皮膚，向下剝?nèi)ト亢笾つw，將標(biāo)本置于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。將手和用過的器械洗凈后再進行以下步驟。
4. 分離兩腿：用玻璃分針沿脊柱兩側(cè)游離出兩條坐骨神經(jīng)，并于近脊柱處各扎一細(xì)線，然后在扎線與脊柱之間剪斷神經(jīng)。提著神經(jīng)上的細(xì)線，將兩條坐骨神經(jīng)分別置于兩條大腿上，左手持脊柱，將骶骨翹起，將下位脊柱全部剪除。捏著兩側(cè)髂骨向反方向分離，使恥骨聯(lián)合脫臼后，沿恥骨聯(lián)合正中將兩下肢剪開，將一條腿浸于任氏液中備用，另一條置于浸有任氏液的玻璃板上。
5. 游離坐骨神經(jīng)和剪斷股骨：認(rèn)清坐骨神經(jīng)溝和腓腸肌的部位，用剪刀剪斷梨狀肌及其周圍的結(jié)締組織，左手提著神經(jīng)上的細(xì)線，右手持剪刀或玻璃分針沿坐骨神經(jīng)溝細(xì)心剝離，直至將坐骨神經(jīng)剝離到腘窩。將游離干凈的坐骨神經(jīng)放在下腿上，沿膝關(guān)節(jié)的周圍將大腿的所有肌腱剪斷，并用剪刀刮凈股骨下段附著的肌肉，在股骨上1/3處剪去上段股骨及所附的肌肉，這樣制成的稱為坐骨神經(jīng)下腿標(biāo)本。
6. 游離腓腸?。涸谧巧窠?jīng)下腿標(biāo)本的基礎(chǔ)上，用剪刀將跟腱的下端剪斷，在跟腱與肌肉交界處扎一條細(xì)線，左手提線，右手用剪刀游離腓腸肌，直到膝關(guān)節(jié)。zui后用粗剪刀在膝關(guān)節(jié)下將小腿剪去，留下的即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本。做好的標(biāo)本用鋅銅叉的兩極輕輕接觸坐骨神經(jīng)，如腓腸肌立即收縮，表示標(biāo)本的興奮性良好，然后將標(biāo)本放入任氏液中，待其興奮性穩(wěn)定后再進行實驗。
注意事項
1. 已剝離皮膚的組織避免接觸皮膚毒液或其他不潔物。
2. 分離神經(jīng)時，一定要用玻璃分針，不能隨便用刀、剪進行操作。
3. 不能過分牽拉神經(jīng)，以免造成損傷。
4. 標(biāo)本制備過程中應(yīng)適當(dāng)?shù)赜萌问弦簼駶櫂?biāo)本。
5. 避免用手指或金屬器械接觸或夾持標(biāo)本的神經(jīng)肌肉部分。
