LB培養(yǎng)基的配方如下:
酵母提取物 5g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
瓊脂 15~20g
水 1000mL
pH 7.4~7.6
使用器材:
酵母提取物,蛋白胨, NaCl,瓊脂;
1mol/L NaOH, 1mol/L HCl;
試管,三角燒瓶,燒杯,量筒,玻棒,培養(yǎng)基分裝器,天平,牛角匙,高壓蒸汽滅菌鍋,pH試紙(pH 5.5~9.0),棉花,牛皮紙,記號(hào)筆,麻繩,紗布等。
操作步驟:
1.稱量
按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。蛋白胨很易吸潮,在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。另外,稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜,一把牛角匙用于一種藥品,或稱取一種藥品后,洗凈、擦干,再稱取另一藥品,瓶蓋也不要蓋錯(cuò)。
2.溶化
在 上述燒杯中可先加入少于所需要的水量,用玻棒攪勻,然后,在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。待藥品*溶解后,補(bǔ)充水分到所需的總體積。如果配制固體培養(yǎng)基,將稱 好的瓊脂放入已溶化的藥品中,再加熱溶化,在瓊脂溶化的過(guò)程中,需不斷攪拌,以防瓊脂糊底使燒杯破裂。zui后補(bǔ)足所失的水分。
3.調(diào)pH
在未調(diào)pH前,先用精密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH值,如果pH偏酸,用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入1mol/L NaOH,邊加邊攪拌,并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH值,直至pH達(dá)7.6。反之,則用1mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。注意pH值不要調(diào)過(guò)頭,以避免回調(diào),否則,將會(huì)影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。
對(duì)于有些要求pH值較的微生物,其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計(jì)進(jìn)行(使用方法,可參考有關(guān)說(shuō)明書)。
4.分裝
按實(shí)驗(yàn)要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶?jī)?nèi)。分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。
(1)液體分裝分裝高度以試管高度的1/4左右為宜。
(2)固體分裝分裝試管,其裝量不超過(guò)管高的1/5,滅菌后制成斜面,分裝三角燒瓶的量以不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。
(3)半固體分裝試管一般以試管高度的1/3為宜,滅菌后垂直待凝。
5.加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后,在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染,并保證有良好的通氣性能。
6.包扎
加塞后,將全部試管用麻繩捆扎好,再在棉塞外包一層牛皮紙,以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞,其外再用一道麻繩扎好。用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。三角燒瓶加塞后,外包牛皮紙,用麻繩以活結(jié)形式扎好,使用時(shí)容易解開,同樣用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。
7.滅菌
將上述培養(yǎng)基以1.05kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃,20分鐘高壓蒸汽滅菌。如因特殊情況不能及時(shí)滅菌,則應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存。
8.?dāng)R置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右,將試管棉塞端擱在玻棒上,擱置的斜面長(zhǎng)度以不超過(guò)試管總長(zhǎng)的一半為宜。
9.無(wú)菌檢查
將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃的溫室中培養(yǎng)24~48小時(shí),以檢查滅菌是否*