1．實(shí)驗(yàn)內(nèi)容或原理

某些病毒（如新城疫病毒，禽流感病毒等）能夠與動(dòng)物的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，此即為紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象（HA）。這種紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象可于病毒懸液中加入特異免疫血清所抑制，即為紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)（HI）。

2．需用的儀器或試劑等

動(dòng)物 健康成雞2-5只，被檢雞15-25只。

器材 高壓滅菌器、濾紙、試管、試管架、離心機(jī)、離心管、*、內(nèi)徑2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精燈、石蠟、96孔V型微量凝集試驗(yàn)板、0.025mm微量吸液器、微型振蕩器、微量移液器、脫脂棉等。

藥劑（1）濃縮抗原；（2）生理鹽水或磷酸緩沖鹽水（PBS）；（3）Alsever細(xì)胞保存液；（4）紅細(xì)胞懸液；（5）待檢血清

3．實(shí)驗(yàn)步驟

（1）發(fā)現(xiàn)與鑒定病毒：雞新城疫和禽流感病毒分離后，這些病毒能凝集雞的紅細(xì)胞，又能被特異性的已知免疫血清抑制其凝集反應(yīng)，即可鑒定此病毒。

 （2）診斷病毒性疾?。喝缛⊥话l(fā)病的動(dòng)物早期和恢復(fù)期血清進(jìn)行紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)，如抗體效價(jià)有4倍以上升高，即有診斷意義。

（3）免疫機(jī)體抗體效價(jià)的測(cè)定：

 4.雞新城疫（ND）的HA和HI

（1）試驗(yàn)準(zhǔn)備

 ① 抗原：一般以雞新城疫Ⅱ系或LaUra系凍干苗作為已知抗原，進(jìn)行試驗(yàn)。

 ② 0.7％細(xì)胞懸浮液：由雞翅靜脈或心臟采血，放入含有抗凝劑的滅菌試管（按每毫升血加入3.8％滅菌檸檬酸鈉0.2毫升做抗凝劑）內(nèi)，迅速混勻。如當(dāng)時(shí)不用，可直接采血放入*內(nèi)（保存液2份，血液1份）于4℃冰箱內(nèi)可保存兩周。

紅細(xì)胞懸液的配制：將血液注入離心管中，經(jīng)3000轉(zhuǎn)／分鐘，離心5-10分鐘，用吸管吸去上清液和紅細(xì)胞上層的白細(xì)胞薄膜，將沉淀的紅細(xì)胞加稀釋液（生理鹽水）洗滌。再用離心機(jī)3000轉(zhuǎn)／分鐘離心5-10分鐘，棄上清，再加稀釋液洗滌，如此反復(fù)洗滌三次，將zui后一次離心后的紅細(xì)胞泥，按0.7％的稀釋度加入稀釋液（0.7毫升紅細(xì)胞泥加99.3毫升稀釋液）。

 ③ 被檢血清：將被檢雞群編號(hào)登記，用消毒過(guò)的干燥注射器采血，注入潔凈干燥試管內(nèi)（微量法可用孔徑2-3毫米塑料管由翅靜脈采血），在室溫中靜置或離心，待血清析出后使用。每只雞應(yīng)更換一個(gè)注射器，嚴(yán)禁交叉使用。

④ 稀釋液：為滅菌的生理鹽水。

⑤ *的配制方法：葡萄糖2.05克，檸檬酸鈉（SHOO）0.80克，檸檬酸（2H20）0.055克，氯化鈉0.42克，蒸餾水加至100毫升。過(guò)濾分裝，高壓滅菌10分鐘，放4℃冰箱保存。

（2）紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（HA）   主要是測(cè)定病毒的紅細(xì)胞凝集價(jià)，以確定紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)所用病毒稀釋倍數(shù)（抗原單位）。

雞新城疫病毒的HA試驗(yàn)與HI試驗(yàn)現(xiàn)采用微量法，以u(píng)或v形微孔塑料板代替試管。

① 首先用移液器向每個(gè)孔加入稀釋液一滴（0.05毫升）。

② 用微量移液器取病毒抗原0.05毫升，加入*孔，反復(fù)抽動(dòng)6次后，吸出0.05毫升加入第二孔，在第二孔反復(fù)抽動(dòng)6次后，吸出0.05毫升加入第三孔，如此連續(xù)稀釋至第十一孔后吸出0.05毫升棄去。第12孔不加病毒液為紅細(xì)胞空白對(duì)照。