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微載體培養(yǎng)原理與操作
其原理是將對細(xì)胞無害的微載體顆粒加入培養(yǎng)容器的培養(yǎng)液中,作為載體,使細(xì)胞在微載體表面附著生長,同時通過持續(xù)攪動使微載體始終保持懸浮狀態(tài)。
貼壁依賴性細(xì)胞在微載體表面上的增殖,要經(jīng)歷黏附貼壁、生長和擴(kuò)增三個階段。細(xì)胞只有貼附在固體基質(zhì)表面才能增殖,因此細(xì)胞在微載體表面的貼附是進(jìn)一步鋪展和生長的關(guān)鍵。細(xì)胞主要通過靜電引力和范德華力與微載體黏附,這取決于細(xì)胞與微載體的接觸概率和相融性。
由于動物細(xì)胞無細(xì)胞壁,對剪切力敏感,因此微載體培養(yǎng)在操作中對攪拌轉(zhuǎn)速及攪拌方式的要求都十分嚴(yán)格。微載體培養(yǎng)要求攪拌的速度非常慢,zui大速度75 r/min。細(xì)胞微載體培養(yǎng)通常分為三個時期:貼壁期,過渡期和培養(yǎng)期。貼壁期和過渡期可以使用超低速細(xì)胞磁力攪拌系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng),該系統(tǒng)具有超低的攪拌速度,剪切力小且能在低速下充分混勻細(xì)胞。
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