hbzhan內(nèi)容導(dǎo)讀：分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。常用的波長(zhǎng)范圍為：（1）200～400nm的紫外光區(qū)（2）400～760nm的可見(jiàn)光區(qū),（3）2.5～25μm（按波數(shù)計(jì)為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。
　　
　　所用儀器為紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。為保證測(cè)量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按照國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進(jìn)行校正檢定。
　　
　　分光光度計(jì)是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對(duì)保持儀器良好的性能和保證測(cè)試的準(zhǔn)確度有重要作用。
　　
　　（1）儀器工作環(huán)境的要求
　　
　　分光光度計(jì)對(duì)工作環(huán)境的要求如下：
　　
　?、賰x器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃．相對(duì)濕度不超過(guò)85％。
　　
　?、趦x器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，且避免強(qiáng)烈的振動(dòng)或持續(xù)的振動(dòng)。
　　
　?、凼覂?nèi)照明不宜太強(qiáng)，且應(yīng)避免直射日光的照射。
　　
　?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風(fēng)，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
　　
　?、荼M量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場(chǎng)、電場(chǎng)及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
　　
　　⑥供給儀器的電源電壓為AC220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。
　　
　　⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場(chǎng)所使用。
　　
　?。?）儀器的日常維護(hù)和保養(yǎng)
　　
　　①光源。光源的壽命有限，為了延長(zhǎng)光源使用壽命，在不使用儀器時(shí)不要開(kāi)光源燈，應(yīng)盡量減少開(kāi)關(guān)次數(shù)。在短時(shí)問(wèn)的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開(kāi)啟。
　　
　　儀器連續(xù)使用時(shí)間不應(yīng)超過(guò)3h。若需長(zhǎng)時(shí)間使用，間歇30min。
　　
　　如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應(yīng)及時(shí)更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過(guò)，要用無(wú)水乙醇擦拭。
　　
　?、趩紊?。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開(kāi)。選擇波長(zhǎng)應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動(dòng)，不可用力過(guò)猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑（硅膠）。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。
　　
　?、畚粘?。必須正確使用吸收池，應(yīng)特別注意保護(hù)吸收池的兩個(gè)光學(xué)面。
　　
　?、軝z測(cè)器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長(zhǎng)時(shí)間曝光，且應(yīng)避免強(qiáng)光照射或受潮積塵。
　　
　?、莓?dāng)儀器停止工作時(shí)，必須切斷電源。
　　
　?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污，在停止工作時(shí)，應(yīng)蓋上防塵罩。
　　
　?、邇x器若暫時(shí)不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機(jī)呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
　　
　　紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)類型
　　
　　紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)按使用波長(zhǎng)范圍可分為：可見(jiàn)分光光度計(jì)和紫外一可見(jiàn)分光光度汁兩類。前者使用的波長(zhǎng)范圍為400～780nm；后者使用的波長(zhǎng)范圍為200～1000nm。
　　
　　按光路紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)可分為單光束式及雙光束式兩類；按測(cè)量時(shí)提供的波長(zhǎng)數(shù)又可分為單波長(zhǎng)分光光度計(jì)和雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)兩類。
　　
　　所謂單光束是指從光源中發(fā)出的光，經(jīng)過(guò)單色器等一系列光學(xué)元件及吸收池后，zui后照在檢測(cè)器上時(shí)始終為一束光。常用的單光束紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)有751G型、752型、754
　　
　　型、756MC型等。常用的單光束可見(jiàn)分光光度計(jì)有721型、722型、723型、724型等。
　　
　　單光束分光光度計(jì)的特點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、價(jià)格低，主要適于作定量分析。其不足之處是測(cè)定結(jié)果受光源強(qiáng)度波動(dòng)的影響較大，因而給定量分析結(jié)果帶來(lái)較大誤差。
　　
　　雙光束分光光度計(jì)是指從光源中發(fā)出的光經(jīng)過(guò)單色器后被一個(gè)旋轉(zhuǎn)的扇形反射鏡（即切光器）分為強(qiáng)度相等的兩束光，分別通過(guò)參比溶液和樣品溶液。利用另一個(gè)與前一個(gè)切光器同步的切光器，使兩束光在不同時(shí)間交替地照在同一個(gè)檢測(cè)器上，通過(guò)一個(gè)同步信號(hào)發(fā)生器對(duì)來(lái)自兩個(gè)光束的信號(hào)加以比較，并將兩信號(hào)的比值經(jīng)對(duì)數(shù)變換后轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的吸光度值。
　　
　　常用的雙光束紫外一可見(jiàn)分光光度計(jì)有710型、730型、760MC型、760CRT型、日本島津UV一210型等。這類儀器的特點(diǎn)是：能連續(xù)改變波長(zhǎng)，自動(dòng)地比較樣品及參比溶液的透光強(qiáng)度，自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差。對(duì)于必須在較寬的波長(zhǎng)范圍內(nèi)獲得復(fù)雜的吸收光譜曲線的分析，此類儀器極為合適。
　　
　　雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)與單波長(zhǎng)分光光度計(jì)的主要區(qū)別在于采用雙單色器，以同時(shí)得到兩束波長(zhǎng)不同的單色光。光源發(fā)出的光分成兩束，分別經(jīng)兩個(gè)可以自由轉(zhuǎn)動(dòng)的光柵單色器，得到兩束具有不同波長(zhǎng)A1和A2的單色光。借切光器，使兩束光以一定的時(shí)間問(wèn)隔交替照射到裝有試液的吸收池上，由檢測(cè)器顯示出試液在波長(zhǎng)λ1和λ2的透射比差值△r或吸光度差值△A，則
　　
　　△A＝Aλ1－Aλ2＝﹙Eλ1－Eλ2）bc
　　
　　由式可知，△A與吸光物質(zhì)c成正比。這就是雙波長(zhǎng)分光光度進(jìn)行定量分析的理論根據(jù)。
　　
　　常用的雙光束分光光度計(jì)有國(guó)產(chǎn)wFZ800S、日本島津UV一300、UV一365等。
　　
　　這類儀器的特點(diǎn)是：不用參比溶液，只用一個(gè)待測(cè)溶液，因此可以消除背景吸收干擾，包括待測(cè)溶液與參比溶液組成的不同及吸收液厚度的差異的影響，提高了測(cè)量的準(zhǔn)確度。它特別適合混合物和渾濁樣品的定量分析，可進(jìn)行導(dǎo)數(shù)光譜分析等。其不足之處是價(jià)格昂貴。