廈門慧嘉生物科技有限公司作者
豬催乳素(PRL)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測(cè)定豬血清、血漿或其它相關(guān)生物液體中催乳素含量。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的催乳素抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的催乳素抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的催乳素呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(
試劑盒組成及試劑配制
1、 酶標(biāo)板:一塊(96孔)
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
6、 檢測(cè)溶液A:1×120
7、 檢測(cè)溶液B:1×120
8、 底物溶液:1×10ml/瓶。
9、 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。
11、覆膜:5張
12、使用說明書:1份
自備物品
1、 酶標(biāo)儀(建議儀器使用前提前預(yù)熱)
2、 微量加液器及吸頭,EP管
3、 蒸餾水或去離子水,濾紙
標(biāo)本的采集及保存
1、 血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4
2、 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于
3、 其它生物標(biāo)本:請(qǐng)
4、 樣本處理:血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10倍,如:稀釋10倍,取100uL血清或血漿加入900uL樣品稀釋液。標(biāo)本使用
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37
1、 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100
性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100
3、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400
4、 每孔加檢測(cè)溶液B工作液(臨用前配制)100
5、 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6、 每孔加底物溶液90
7、 每孔加終止溶液50
8、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(
1、 試劑準(zhǔn)備:所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫,使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2、 加樣:加樣或加試劑時(shí),*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
3、 溫育:為防止樣品蒸發(fā),實(shí)驗(yàn)時(shí)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi),以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。
4、 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5、 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配制使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請(qǐng)配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配制(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10
6、 反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7、 底物:底物請(qǐng)避光保存,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
洗板方法
1、 手工洗板方法:將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
2、 自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。
特異性
本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的豬催乳素,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。
計(jì)算
各標(biāo)準(zhǔn)品及樣本
檢測(cè)范圍:78 pg/ml - 5,000 pg/ml,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線請(qǐng)取用以下濃度值:5,000 pg/ml,2,500 pg/ml,1,250 pg/ml,625 pg/ml,312 pg/ml,156 pg/ml,78 pg/ml。
zui低檢測(cè)限:19.5 pg/ml
1、 由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,
本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。
2、 zui終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必
準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。
3、 在儲(chǔ)存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和微生物的 污染,因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
4、 試劑盒保存:請(qǐng)收到試劑盒后盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A和檢測(cè)溶液B保存于-20
5、 濃洗滌液會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
6、 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
7、 有效期:6個(gè)月。
8、 本操作說明適用于48T試劑盒,但48T試劑盒所有試劑減半。
廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的。致力于各種ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、一抗二抗、細(xì)胞因子、生物試劑、移液器、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作。
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