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牛布魯氏桿菌抗體ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

2010年10月15日 13:43:51人氣:411來(lái)源:廈門慧嘉生物科技有限公司

 

布魯氏桿菌抗體ELISA試劑盒使用說(shuō)明書
本試劑僅供研究使用      目的:本試劑盒用于測(cè)定牛血清,血漿及相關(guān)液體樣本中布魯氏桿菌抗體的表達(dá)。
實(shí)驗(yàn)原理:
 本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測(cè)定標(biāo)本中牛布魯氏桿菌抗體。用純化的牛布魯氏桿菌抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中布魯氏桿菌抗體相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的布魯氏桿菌抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中牛布魯氏桿菌抗體的存在與否。
 
試劑盒組成

試劑盒組成
48孔配置
96孔配置
保存
說(shuō)明書
1份
1份
 
封板膜
2片(48)
2片(96)
 
密封袋
1個(gè)
1個(gè)
 
酶標(biāo)包被板
1×48
1×96
2-8保存
陰性對(duì)照
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8保存
陽(yáng)性對(duì)照
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8保存
酶標(biāo)試劑
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
樣品稀釋液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
顯色劑A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
顯色劑B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
終止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8保存
濃縮洗滌液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8保存

 
樣本處理及要求
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
 
操作步驟:
1.         編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2.         加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 
結(jié)果判定:
  試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
 臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為牛布魯氏桿菌抗體陰性
 陽(yáng)性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為牛布魯氏桿菌抗體陽(yáng)性
注意事項(xiàng)
1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請(qǐng)避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。
 
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8。
2.有效期:6個(gè)月
廈門慧嘉生物科技有限公司專業(yè)代理眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的。致力于各種ELISA試劑盒、免疫組化試劑盒、一抗二抗、細(xì)胞因子、生物試劑、移液器、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作。
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關(guān)鍵詞:酶標(biāo)儀 移液器
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