小鼠白細(xì)胞介素8（IL-8 ）Elisa試劑盒使用說明書

【資料簡介】

小鼠白細(xì)胞介素8（IL-8 ）Elisa試劑盒實驗原理 ：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠白細(xì)胞介素 8（IL-8）水平。用純化的小鼠
白細(xì)胞介素 8（IL-8）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素 8（IL-8），再與 HRP 標(biāo)記的白細(xì)胞介素 8（IL-8）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素 8（IL-8）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠白細(xì)胞介素 8（IL-8）濃度。
試劑盒組成：
試劑盒組成  48 孔配置  96 孔配置  保存
說明書   份   份 
封板膜  2 片（48）  2 片（96） 
密封袋   個   個 
酶標(biāo)包被板  ×48  ×96  2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品：35pg/mL  0.5ml× 瓶  0.5ml× 瓶  2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  .5ml× 瓶  .5ml× 瓶  2-8℃保存
酶標(biāo)試劑  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
樣品稀釋液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
顯色劑 A 液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
顯色劑 B 液  3 ml× 瓶  6 ml× 瓶  2-8℃保存
終止液  3ml× 瓶  6ml× 瓶  2-8℃保存
20 倍濃縮洗滌液  20ml× 瓶  30ml× 瓶  2-8℃保存
小鼠白細(xì)胞介素8（IL-8 ）Elisa試劑盒樣本處理及要求：
.血清：室溫血液自然凝固 0-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 0-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3.尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到 00 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘2左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
操作步驟
.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 0 孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 00µl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50µl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取 00µl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50µl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl 棄掉，再各取 50µl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50µl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50µl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50µl，混勻后從第九第十孔中各取 50µl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50µl，濃度分別為 90 pg/mL，60 pg/mL ，30 pg/mL，5 pg/mL，7.5 pg/mL）。
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 0µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.  配液：將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同 3。
8.  洗滌：操作同 5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5 分鐘.
0. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止液后 5 分鐘以內(nèi)進行。
注意事項 ：
． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 5-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
0. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
計算 ：
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
試劑盒性能 ：
.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.990 以上。
2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于 9%和 %
檢測范圍 ：
5 pg/mL -00 pg/mL
保存條件及有效期 ：
.試劑盒保存：2-8℃。
2．小鼠白細(xì)胞介素8（IL-8 ）Elisa試劑盒有效期：6 個月