放射性免疫分析方法

【資料簡介】

放射性免疫分析方法

一、標(biāo)記物制備

（一）*化抗體按文獻(xiàn)Eli方法制備，在雙標(biāo)記IRMA法采用標(biāo)記純化的McAbIgG，在競爭法采用標(biāo)記純化IgG。

（二）異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記物采用微量透析法。標(biāo)記的抗體依檢測反應(yīng)模式不同而異。

（三）標(biāo)記物競爭法檢測小分子化合物，標(biāo)記物為抗原，雙標(biāo)記液相IRMA，標(biāo)記物為McAb，標(biāo)記方法按常規(guī)氯胺T氧化法。

二、磁性微粒子固相抗體制備

按照檢測反應(yīng)模式的不同，需要制備不同的磁性微粒子固相抗體]，如固相一抗體，固相二抗體。

取直徑800～2000nm 磁性微粒子（表面羧基化），用生理鹽水洗滌。按1O倍量懸浮于生理鹽水中，在緩緩振蕩下加入適量抗體IgG ，立即按IgG對偶聯(lián)劑2O倍（M：M ）的量加入碳化二亞胺（EDC），在室溫振蕩下反應(yīng)2h。再補(bǔ)加10倍量的EDC，移至4℃ 反應(yīng)過夜。次晨，再經(jīng)生理鹽水充分洗滌，直至上清液經(jīng)紫外分光光度計(jì)280nm 測量A 值大于0.02。zui后加含有0.5 BSA，0.1ONa N3的25mmol/L pH 7.4 PBS中，4℃保存。

三、IRMA檢測法反應(yīng)模式

（一）雙標(biāo)記FITC 抗FITC 法

將兩株McAb分別標(biāo)記FITC和I，按經(jīng)優(yōu)化的比例混合稀釋液作為標(biāo)記試劑。檢測時(shí)，將樣品和標(biāo)記試劑各100ttL加至12×75mm管中，充分混合，放37℃水浴中30~60min，生成夾心免疫復(fù)合物。加入抗FITC磁性微粒子懸浮液100tLL，室溫反應(yīng)5min，置磁性分離器上。傾去管中上清液，用PBS—T洗液0.5mL洗兩次，在自動r計(jì)數(shù)器上按雙對數(shù)或四參數(shù)方程處理測量數(shù)據(jù)，即可打印出相關(guān)參數(shù)和待測樣品濃度。

（二）雙標(biāo)記BAS法

該法是將兩株McAb分別標(biāo)記*和I作為標(biāo)記試劑，以磁性微粒子固相為分離試劑。其余同上法。

（三）磁性固相一抗法

此模式和常規(guī)IRMA的實(shí)驗(yàn)原理相同，將兩株McAb分別標(biāo)記I和制備磁性微粒子固相。檢測時(shí)，取待測樣品、I—McAb和磁性微粒子McAb懸浮液各100/1L于管中混勻，37℃溫育后，即可在磁性分離器進(jìn)行洗滌分離，去除游離I-McAb，操作雖簡便，但主要缺點(diǎn)是每一檢測項(xiàng)目要單獨(dú)制備磁性微粒子固相抗體，既繁瑣又不經(jīng)濟(jì)。

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