当着夫的面被夫上司玩弄,最近免费中文字幕中文高清百度 ,超碰CAOPORON入口,精品国产日韩一区二区三区

技術(shù)中心

牛型放線菌PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

2020年07月17日 14:17:34人氣:104來源:上海一研生物科技有限公司

資料類型docx文件資料大小15493
下載次數(shù)61資料圖片 【點(diǎn)擊查看】
上 傳 人上海一研生物科技有限公司 需要積分0
關(guān) 鍵 詞牛型放線菌PCR試劑盒,牛型放線菌PCR試劑盒
【資料簡介】

牛型放線菌PCR試劑盒說明書

產(chǎn)品名稱:牛型放線菌PCR試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)

特異性強(qiáng)

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。


產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
具有下列特點(diǎn):
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數(shù)量級,可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
規(guī)格及成分                            成分
 2×qPCR MagicMix                 500 μL(裝 A 袋)
微量核酸稀釋液(熒光 PCR )1 mL(裝 A 袋)
PCR 引物混合物                        100 μL(裝 A 袋)
基因陽性對照                           50 μL(裝 B 袋)
DNA 病毒裂解液(試用裝)       15 次(9 mL)
使用手冊                              1 份
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸、-20℃保存(A 袋試劑放樣品準(zhǔn)備區(qū)、B 袋的陽性對照好分開放置),
自備試劑DNA 模板、10×ROX(根據(jù)機(jī)型決定,具體見使用方法)。
應(yīng)用案例
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀釋陽性對照(以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DNA 段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液(好用帶芯槍頭,下同)。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭,在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中,得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
牛型放線菌PCR試劑盒設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20  μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待測樣品需要做三次重復(fù),下表只列出一次。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后后加):
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對照,其他熒光 PCR 儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。
10. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行
優(yōu)化)。
過程溫度時間
預(yù)變性95℃1 分鐘
PCR 反應(yīng)95℃15 秒
(30 個循環(huán))60℃15 秒
72℃15 秒
11. 數(shù)據(jù)采集
具體操作按所用儀器的流程進(jìn)行。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合 DNA 時,
譜在 530 nm。
四、數(shù)據(jù)處理
12. 以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品
的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項(xiàng):

1.基礎(chǔ)程序;

2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;

3.反應(yīng)時間;

4.循環(huán)次數(shù);

5.PCR 反應(yīng)液的配制;

6.PCR技術(shù)的基本原理;

7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);

8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;

9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
【儲存條件及有效期】:

-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融,有效期6個月。

【適用儀器】:

ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。

【樣本采集、存放及運(yùn)輸】

u 樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;

u 存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(多凍融3次);

u 運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

【自備試劑】:產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)

上海一研生物科技有限公司作者

上一篇:日處理20噸醫(yī)院生活污水處理成套設(shè)備工藝說明

下一篇:生物接觸氧化工藝農(nóng)村污水處理設(shè)備報價


我要投稿
  • 投稿請發(fā)送郵件至:(郵件標(biāo)題請備注“投稿”)hbzhan@vip.qq.com
  • 聯(lián)系電話0571-87759680
環(huán)保行業(yè)“互聯(lián)網(wǎng)+”服務(wù)平臺
環(huán)保在線APP

功能豐富 實(shí)時交流

環(huán)保在線小程序

訂閱獲取更多服務(wù)

微信公眾號

關(guān)注我們

抖音

環(huán)保在線網(wǎng)

抖音號:hbzhan

打開抖音 搜索頁掃一掃

視頻號

環(huán)保在線

公眾號:環(huán)保在線

打開微信掃碼關(guān)注視頻號

快手

環(huán)保在線

快手ID:2537047074

打開快手 掃一掃關(guān)注
意見反饋
宜阳县| 鄂伦春自治旗| 昌图县| 遂溪县| 灵台县| 新晃| 黔东| 禄丰县| 江达县| 大关县| 洪雅县| 微山县| 桐柏县| 尚志市| 南开区| 桐梓县| 越西县| 安阳县| 南皮县| 南投市| 荆州市| 久治县| 平度市| 无极县| 永定县| 勐海县| 天长市| 潮安县| 伊宁县| 台南县| 娱乐| 卢龙县| 古交市| 汪清县| 元朗区| 孟州市| 乌拉特前旗| 乌鲁木齐县| 洞口县| 宁夏| 吴江市|