雙歧桿菌特定酶的檢測

【資料簡介】

雙歧桿菌特定酶的檢測

利用果糖-6-磷酸鹽對分離得到的菌種進(jìn)行果糖-6-磷酸鹽磷酸酮酶（F6PPK）的測定，初步確定菌種是否為雙歧桿菌屬。F6PPK測定的操作如下：

①將從樣品中分離出的雙歧桿菌培養(yǎng)于厭氧液體改良MRS培養(yǎng)基中37℃生長24 h。

②將菌液4400 rpm離心10 min,收集菌體，緩沖液ⅰ洗滌2次，zui后溶于約4 mL緩沖液ⅰ中，制成細(xì)菌懸液。

緩沖液ⅰ：現(xiàn)用現(xiàn)配。取0.05 M Na2HPO4 31.5 mL和0.05 M NaH2PO468.5 mL,再加500 mg/L半*-鹽酸鹽。

③用超聲波粉碎儀，400 W條件下；每處理5 s、間隔5 s,超聲粉碎8 min，至菌體溶液呈半透明。

④破碎后，取0.5 mL于離心管中，加試劑ⅱ和ⅲ各125 µL,37℃保溫30 min。

ⅱ6 mg/mL氟化鈉加10 mg/mL碘乙酸鈉。

ⅲ果糖-6-磷酸鹽80 mg/mL水溶液。

⑤加試劑ⅳ0.750mL,室溫10 min。

ⅳ現(xiàn)用現(xiàn)配。鹽酸羥胺139 mg/mL。酸性*，用氫氧化鈉中和至pH6.5。

⑥加試劑ⅴ和ⅵ各500 µL,室溫5 min。

⑦加試劑ⅶ500 µL,顯色。紅褐色或紅紫色為陽性，黃色為陰性。

ⅶ0.5 g/100 mL FeCl3·6H2O溶于0.1 MHCl。