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鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)elisa試劑盒說明書

2022年04月22日 16:09:46人氣:80來源:上海谷研生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)elisa試劑盒,鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGF
【資料簡介】

鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)elisa試劑盒說明書


ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領(lǐng)域的應用范圍日益擴大,可概括四個方面:


1、免疫酶染色各種細胞內(nèi)成份的定位。


2、研究抗酶抗體的合成。


3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應。


4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。


 組成 :


試劑盒組成      48孔配置            96孔配置            保存


說明書             1份                1份  


封板膜          2片(48)          2片(96)   


密封袋             1個                1個  


酶標包被板        1×48             1×96            2-8℃保存


標準品          0.3ml×6瓶         0.3ml×6瓶         2-8℃保存


標準品稀釋液    3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


檢測抗體-HRP    5ml×1瓶           10ml×1瓶          2-8℃保存


顯色劑A液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


顯色劑B液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


終止液          3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


20*洗滌緩沖液   25ml×1瓶          15ml×1瓶          2-8℃保存



需自備的設(shè)備及試劑:


1.450±10nm濾光片酶標儀(建議儀器使用前預熱)


2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.


3.Eppendorf 移液器.


4.蒸餾水或去離子水.


5.脫脂棉吸水紙.


6.37℃恒溫箱.


7.100ml和1000ml量筒.


8.準備若干個標準品稀釋管.


 

注意事項


1.試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實驗操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。


2.加樣:加樣時,要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,否則將會導致不同的預孵育時間,從而影響實驗的準確性以及重復性;一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。


3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進行孵育,嚴格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進行。


4.洗滌:洗滌過程中反應孔中的殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標儀讀數(shù)。


5.反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應。


6.建議實驗前預測樣品含量,如樣品濃度過高,應對樣品進行稀釋,計算結(jié)果時乘以相應的稀釋倍數(shù)。


7.建議使用本試劑盒時先做預實驗(即先做標準曲線,試用幾個標本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運輸過程導致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔產(chǎn)品本身以外的任何損失。


 

操作步驟


1. 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實驗過程應在室溫(20-25℃)內(nèi)進行。


2. 取出酶標板,按照標準品的次序分別加入50μl的標準品溶液于空白微孔中。


3. 空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;


4. 在樣品孔中加入10μl的生物su;(不含空白對照孔,切忌:生物su只加樣品孔!)


5. 在各孔中加入100μl的酶標記溶液;(不含空白對照孔)


6. 將酶標板用封口膠密封后,37℃孵育反應 1小時;(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)


7. 充分清洗酶標板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)


8. 酶標板洗滌后用吸水紙*拍干;


9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)


10. 20-25℃下避光反應15分鐘;


11.各孔加入50μl終止液,終止反應;


結(jié)果判斷


1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;


2. 以O(shè)D值為縱坐標,以標準品的濃度為橫坐標,繪制曲線圖;


3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應的濃度范圍;


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