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鹿胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)elisa試劑盒說(shuō)明書

2022年04月22日 16:09:46人氣:82來(lái)源:上海谷研生物科技有限公司

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【資料簡(jiǎn)介】

鹿胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)elisa試劑盒說(shuō)明書


ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體,而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括四個(gè)方面:


1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。


2、研究抗酶抗體的合成。


3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。


4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。


 組成 :


試劑盒組成      48孔配置            96孔配置            保存


說(shuō)明書             1份                1份  


封板膜          2片(48)          2片(96)   


密封袋             1個(gè)                1個(gè)  


酶標(biāo)包被板        1×48             1×96            2-8℃保存


標(biāo)準(zhǔn)品          0.3ml×6瓶         0.3ml×6瓶         2-8℃保存


標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


檢測(cè)抗體-HRP    5ml×1瓶           10ml×1瓶          2-8℃保存


顯色劑A液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


顯色劑B液      3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


終止液          3ml×1瓶           6ml×1瓶           2-8℃保存


20*洗滌緩沖液   25ml×1瓶          15ml×1瓶          2-8℃保存



需自備的設(shè)備及試劑:


1.450±10nm濾光片酶標(biāo)儀(建議儀器使用前預(yù)熱)


2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.


3.Eppendorf 移液器.


4.蒸餾水或去離子水.


5.脫脂棉吸水紙.


6.37℃恒溫箱.


7.100ml和1000ml量筒.


8.準(zhǔn)備若干個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋管.


 

注意事項(xiàng)


1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。


2.加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過(guò)大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過(guò)多,可使用多道移液器。


3.孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。


4.洗滌:洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。


5.反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。


6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。


7.建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn),可和所購(gòu)經(jīng)銷商,如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。


 

操作步驟


1. 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。


2. 取出酶標(biāo)板,按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。


3. 空白微孔中加入50μl的樣品,空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水;


4. 在樣品孔中加入10μl的生物su;(不含空白對(duì)照孔,切忌:生物su只加樣品孔!)


5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液;(不含空白對(duì)照孔)


6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí);(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)


7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)


8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干;


9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對(duì)照孔)


10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;


11.各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);


結(jié)果判斷


1. 30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;


2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖;


3. 根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍;


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