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柱式植物RNAout
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關 鍵 詞 | 柱式植物RNAout |
- 【資料簡介】
柱式植物RNAout
產品及特點 本產品是天澤基因植物RNAOUT(CAT#:3080)的柱式升級產品,它結合了植物RNAOUT的性(其效果在近五十多種各類植物中得到驗證,植物名單見植物RNAOUT產品介紹的附錄)和天澤基因柱式純化系列產品的快捷性。該產品特點如下:
. 操作更加簡單快速,處理一個樣品只需要約十分鐘,比植物RNAOUT快一倍。
2. RNA純度更高,平均 OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數植物中的多糖污染。
3. 小RNA回收效率更高。
4. 適用于所有用植物RNAOUT能提出RNA的植物(注:對有些植物可能需要在溶液A中額外添加RVC)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實驗。
6. 性價比高于進口的柱式植物RNA提取產品。
7. 一站式,提供RNase-free的樣品收集管。
規(guī)格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 50 mL
溶液B 5 mL
溶液C 50 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 0 mL
使用手冊 份運輸及保存 常溫運輸,4℃保存,有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 . 估算組織細胞的用量。每次微量提取一般需要00-200 mg植物葉片、或50-00 mg植物種子、或200-500 mg植物果實。
2. 先將新鮮植物切成小塊(保存在RNALOCKER中的植物組織需用紙吸去RNALOCKER液體后再剪切成小塊),放入0-5 mL塑料離心管中,加入 mL溶液A,然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產生泡沫,但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織,硯磨完后加入 mL溶液A。注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會產生沉淀,使用前必須放在65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉移至干凈的.5 mL塑料離心管中(可以不必轉移非液體的細胞碎片)。有的植物組織(比如果實)含有大量水份,勻漿液會多于 mL,轉移時也只取 mL。
4. 在離心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自備氯仿,在振蕩器上振蕩30秒混勻,此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
5. 室溫2000-5000 g離心3-5分鐘,兩相間將有約5-0毫米厚的細胞破碎物。
6. 將上清液(約0.6 mL)轉移到另一干凈的.5 mL塑料離心管中,下層有機相和中間層含有DNA、蛋白質和其他雜質,避免觸及或吸取。留下00 uL上清液不取。
7. 加入等體積的溶液C,充分顛倒混勻。如果有沉淀產生(對某些植物,屬于正?,F象),千萬不要去掉沉淀,一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的溶液(如果有沉淀,則先混勻)轉移到離心吸附柱中,3000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
9. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀,則先混勻)轉移到同一離心吸附柱中, 3000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
0. 加0.7 mL通用洗柱液,室溫離心半分鐘,棄穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液,室溫離心半分鐘,棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可,但如果在第7步加入溶液C后有沉淀產生,則需要洗三次,每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3 mL。
. 室溫離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
2. 將離心吸附柱轉移到RNase-free收集管中,加入50-00 uL RNA洗脫液,室溫放置-2分鐘。
3. 3000-5000 g室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
4. RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳,因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques,28:44,2000)。
5. RNA產量產率測定:將5-0 μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度( OD260的RNA=40 μg/mL),進而計算出RNA的產量(濃度X體積)和產率(RNA產量/組織用量)。
6. RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在.8-2.之間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染,但一般不影響RT-PCR等反應。
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