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柱式植物RNAout
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上 傳 人 | 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 | 需要積分 | 0 |
關(guān) 鍵 詞 | 柱式植物RNAout |
- 【資料簡介】
柱式植物RNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是天澤基因植物RNAOUT(CAT#:3080)的柱式升級產(chǎn)品,它結(jié)合了植物RNAOUT的性(其效果在近五十多種各類植物中得到驗(yàn)證,植物名單見植物RNAOUT產(chǎn)品介紹的附錄)和天澤基因柱式純化系列產(chǎn)品的快捷性。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下:
. 操作更加簡單快速,處理一個樣品只需要約十分鐘,比植物RNAOUT快一倍。
2. RNA純度更高,平均 OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
3. 小RNA回收效率更高。
4. 適用于所有用植物RNAOUT能提出RNA的植物(注:對有些植物可能需要在溶液A中額外添加RVC)。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。
6. 性價比高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。
7. 一站式,提供RNase-free的樣品收集管。
規(guī)格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 50 mL
溶液B 5 mL
溶液C 50 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 0 mL
使用手冊 份運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸,4℃保存,有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 . 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要00-200 mg植物葉片、或50-00 mg植物種子、或200-500 mg植物果實(shí)。
2. 先將新鮮植物切成小塊(保存在RNALOCKER中的植物組織需用紙吸去RNALOCKER液體后再剪切成小塊),放入0-5 mL塑料離心管中,加入 mL溶液A,然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫,但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織,硯磨完后加入 mL溶液A。注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的.5 mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織(比如果實(shí))含有大量水份,勻漿液會多于 mL,轉(zhuǎn)移時也只取 mL。
4. 在離心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自備氯仿,在振蕩器上振蕩30秒混勻,此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
5. 室溫2000-5000 g離心3-5分鐘,兩相間將有約5-0毫米厚的細(xì)胞破碎物。
6. 將上清液(約0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的.5 mL塑料離心管中,下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì),避免觸及或吸取。留下00 uL上清液不取。
7. 加入等體積的溶液C,充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對某些植物,屬于正常現(xiàn)象),千萬不要去掉沉淀,一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的溶液(如果有沉淀,則先混勻)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,3000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
9. 將剩下的一半溶液(如果有沉淀,則先混勻)轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中, 3000-5000 g室溫離心半分鐘,棄穿透液。
0. 加0.7 mL通用洗柱液,室溫離心半分鐘,棄穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液,室溫離心半分鐘,棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可,但如果在第7步加入溶液C后有沉淀產(chǎn)生,則需要洗三次,每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3 mL。
. 室溫離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
2. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50-00 uL RNA洗脫液,室溫放置-2分鐘。
3. 3000-5000 g室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
4. RNA完整性的電泳檢測:如果需要做Northern雜交,強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳,因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques,28:44,2000)。
5. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定:將5-0 μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度( OD260的RNA=40 μg/mL),進(jìn)而計算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
6. RNA純度測定:無污染的總RNA的OD260/OD280一般在.8-2.之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)),高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染,但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。
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