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四環(huán)素(TCs)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

2014年03月12日 08:11:27人氣:361來(lái)源:上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司

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關(guān) 鍵 詞四環(huán)素
【資料簡(jiǎn)介】

四環(huán)素(TCs)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

本試劑盒僅供研究使用。

1 使用目的:

本試劑盒用于魚(yú)、蝦和肉類(lèi)組織(如雞、牛肉和豬肉),牛奶,蜂蜜中四環(huán)素(TCs)殘

留的定量檢測(cè)。

2 實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA 方法,在微孔板包被有四環(huán)素(TCs)偶聯(lián)抗原,加入四環(huán)素

TCs)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離四環(huán)素(TCs)與微孔條上預(yù)包被的四環(huán)素(TCs)偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗四環(huán)素(TCs)抗體酶標(biāo)記物,用TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè),吸光值與樣品中四環(huán)素(TCs)含量成反比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中四環(huán)素(TCs)的含量。

3 試劑盒組成

3.1 預(yù)包被的四環(huán)素(TCs)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1 塊(12 孔×8 條)。

3.2 四環(huán)素(TCs)標(biāo)準(zhǔn)品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ppb,0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7ppb,8.1 ppb

3.3 抗四環(huán)素(TCs)抗體酶結(jié)合物:1 瓶(6ml)。

3.4 顯色液A1 瓶(6ml)。

3.5 顯色液B1 瓶(6ml)。

3.6 終止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。

3.7 *:1 瓶(10×, 6ml),用于樣品稀釋用。

3.8 濃縮洗滌液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。

3.9 說(shuō)明書(shū)一份。

4 需要而未提供的材料

4.1 設(shè)備

4.1.1波長(zhǎng)450nm酶標(biāo)儀。

4.1.2粉碎機(jī)。

4.1.3量筒。

4.1.4振蕩器。

4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相當(dāng)?shù)臑V紙。

4.1.7微量移液器。

4.2 試劑

4.2.1去離子水或蒸餾水。

4.2.2 甲醇。

5 貯存

5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存

6 注意事項(xiàng)

6.1 使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

6.2 不要使用過(guò)期試劑盒。

6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。

6.4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有四環(huán)素(TCs),使用時(shí)應(yīng)特別注意,操作時(shí)應(yīng)帶手套。

6.5 終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

6.6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。

6.7 不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

6.8 稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的*,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

6.9 混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。

7 工作液準(zhǔn)備

7.1 四環(huán)素(TCs)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb

7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

7.3 *:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用

7.3 顯色劑:已備用,避免光線(xiàn)直照

7.4 反應(yīng)終止液:已備用

8 樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作,提取過(guò)程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋?zhuān)駝t會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

8.110g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2強(qiáng)力振蕩3分鐘

8.3Whatman 濾紙過(guò)濾

8.425μl處理后的樣品,加入25μl*于反應(yīng)孔中(樣本稀釋倍數(shù)為2

9 酶免分析步驟

9.1 實(shí)驗(yàn)須知

9.1.1 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注:一定保證回溫充分,否則影響檢測(cè)的度和準(zhǔn)確度。

9.1.2 使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存

9.1.3 請(qǐng)不要改變分析程序

9.1.4 請(qǐng)使用的微量移液器

9.1.5 操作一旦開(kāi)始,請(qǐng)不要中斷任何程序

9.1.6 ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作

9.1.7 為避免交叉污染,每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣

9.1.8 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

9.2 分析步驟

9.2.1 預(yù)*行編號(hào),標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測(cè)

9.2.2 取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

9.2.4 B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液

9.2.5 在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液

9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗四環(huán)素(TCs)抗體酶結(jié)合物

9.2.8 輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。

9.3 37℃溫浴30min (溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)

9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。

9.4 反應(yīng)

9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯色液B;輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻

9.4.2 37℃溫浴10min

9.4.3 每孔中加入50μl終止液,混勻

9.4.4 450nm下檢測(cè)吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。

10 結(jié)果計(jì)算

10.1定量分析

10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

10.1.2以四環(huán)素(TCs)濃度的對(duì)數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線(xiàn)上得到對(duì)應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為四環(huán)素(TCs)濃度的對(duì)數(shù)值,求得反對(duì)數(shù)即為測(cè)定液中四環(huán)素(TCs)濃度Cppb

10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預(yù)先稀釋?zhuān)虼烁鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。

10.2 半定量測(cè)定

10.1.1目測(cè)半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

10.1.2儀器半定量測(cè)定:首先選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

11 特異性

物質(zhì) 交叉反應(yīng)

四環(huán)素(TCs 100%

二甲胺四環(huán)素 125%

吡四環(huán)素 110%

* 45%

* 100%

脫甲基* 35%

* 58%

12 試劑盒參數(shù)

本試劑盒檢測(cè)下限為0.05ppb

B0吸光度*值應(yīng)大于1.0

試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。

用本說(shuō)明書(shū)提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。

13 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)模式(僅供參考)

試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)范圍為0.1ppb~8.1ppb 。

14 分析限制

本試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLCGC/MS加以確證。__

上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司作者

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