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大鼠巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA檢測

2014年04月16日 10:57:35人氣:226來源:上??ㄅ锟萍加邢薰?/span>

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關 鍵 詞大鼠巨噬細胞炎性蛋白,1α(MIP-1α/CCL3),ELISA檢測
【資料簡介】

www.biokanu.com

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷

大鼠巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA檢測

試劑盒使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  1. 酶標儀(450nm)
  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  3. 37恒溫箱

操作注意事項

  1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
  2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
  3.   標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
  4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品(24pg/ml

0.6mL

0.6mL

按說明書進行稀釋

標準品稀釋液

6mL

3mL

*

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:2412、6、31.5、0.75pg/ml

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  1.   手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
  2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.   待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加*40μL;
  4.   隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 pg/ml。

3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

上海卡努生物科技有限公司作者

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