新生大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)

【資料簡(jiǎn)介】

將出生2天以內(nèi)的新生SD大白鼠10只，用75%的酒精浸泡消毒后，采用無(wú)菌方法迅速取出大腦，用冷的D-Hanks液清洗并剔除腦膜和血管，取大腦皮質(zhì)，將碎為1mm3，用0.125%,37ºC消化10分鐘，過(guò)濾（200目尼龍濾網(wǎng)），離心（1000rpm 10分鐘）。

去上清，加入DMEM/F12*培養(yǎng)基（其中含10%胎牛血清，10%馬血清，L-2mmol/L，100u/ml,100μg/ml）制成細(xì)胞懸液。

計(jì)數(shù)后按5×105/cm2接種于培養(yǎng)瓶。貼附30min后，轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液至新瓶中，加入DMEM/F12*培養(yǎng)基，在37ºC, 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9天（每3天更換培養(yǎng)液一次），第9天將培養(yǎng)瓶置于恒溫旋轉(zhuǎn)搖床上37ºC, 240rpm，搖18小時(shí)，去掉懸浮的細(xì)胞，用D-Hanks液清洗3次，進(jìn)行傳代培養(yǎng)即得純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞。

經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)，98%以上的細(xì)胞GFAP免疫反應(yīng)為陽(yáng)性。