外周血細(xì)胞瑞氏（Wright）染色及計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)

【資料簡介】

正血液常規(guī)檢查是臨床使用zui多的化驗(yàn)項(xiàng)目，其中白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)又是血常規(guī)中必做化驗(yàn)之一。目前，我國各地醫(yī)院化驗(yàn)室在做白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)時，其血涂片多采用瑞氏(Wright’s)染色法。瑞氏染料中有美藍(lán)和伊紅兩種成分，前者為堿性，后者為酸性，它們與細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力，使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào)。

實(shí)驗(yàn)方法

• 涂片法

實(shí)驗(yàn)方法原理	瑞氏染料中有美藍(lán)和伊紅兩種成分，前者為堿性，后者為酸性，它們與細(xì)胞內(nèi)的各種物質(zhì)具有不同的親和力，使其顯現(xiàn)出不同的色調(diào)。血細(xì)胞核由去氧核糖核酸和強(qiáng)堿性的組蛋白、精蛋白等形成核蛋白。這種強(qiáng)堿性的物質(zhì)與瑞氏染料中的酸性染料伊紅有親和力，所以染成紅色；核蛋白中還有少量的弱酸性蛋白，它們又與染液中的堿性染料美藍(lán)起作用而染成藍(lán)色，但含量太少，藍(lán)色反應(yīng)極弱 ，故核染色呈現(xiàn)紫紅色。較幼稚的細(xì)胞之胞漿和細(xì)胞核之核仁中含有酸性物質(zhì)，它們與染料中的堿性染料美藍(lán)有親和力，故染成藍(lán)色。
實(shí)驗(yàn)材料	血液
試劑、試劑盒	瑞氏染料純甲醇磷酸二氫鉀*
儀器、耗材	顯微鏡玻片蓋玻片滴管
抗體	Hamster IgG3, λ抗體 Hamster IgG3, λ抗體 Hamster IgG3, λ抗體
實(shí)驗(yàn)步驟	1.  制作血涂片 （1）滴一小滴血（約5 ul）于干凈玻片上，推片與玻片應(yīng)呈約30°角，用力均勻而較快，且不可復(fù)推。 （2）如血滴較小，推得較慢，角度小于30°，所制涂片較薄。 （3）如血滴較大，推得較快，角度比30°大時，則所制涂片較厚。 2.  將標(biāo)本放平（置于一個固定架上），用滴管將染液滴于涂片上，可用滴管將染液驅(qū)散，使其布滿整個涂片。 3.  染液布滿整個涂片后，稍等片刻或立即加入緩沖液，并使緩沖液與染液混均勻。 4. 染液與緩沖液的比例 （1）染液量要充足，否則染液很快蒸發(fā)，將染料沉淀于細(xì)胞上。 （2）染液與緩沖液的比例為1：2~4左右比較合適。 （3）稀釋度越大，染色時間越長，細(xì)胞著色較好，反之則越差。 5. 染色時間：視具體情況而定，一般約需10~30分鐘。 6. 沖洗：用自來水沖洗涂片上之染料。 7. 顯微鏡檢查：待自然干燥后用光學(xué)顯微鏡檢查。