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技術(shù)中心

大鼠*原酶(Try)ELISA分析檢測試劑盒技術(shù)標(biāo)準

2015年09月09日 10:13:20人氣:265來源:上海谷研實業(yè)有限公司

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關(guān) 鍵 詞大鼠*原酶,Try,ELISA分析檢測試劑盒
【資料簡介】

大鼠*原酶(Try)ELISA分析檢測試劑盒技術(shù)標(biāo)準

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍:96T
3μg/L -120μg/L

使用目的:大鼠*原酶(Try)ELISA分析檢測試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素 (ET)含量。

實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠內(nèi)皮素 (ET)水平。用純化的大鼠內(nèi)皮素 (ET)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素 (ET),再與HRP標(biāo)記的內(nèi)皮素 (ET)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素 (ET)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準曲線計算樣品中大鼠內(nèi)皮素 (ET)濃度。

大鼠*原酶(Try)ELISA分析檢測試劑盒標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟
1.標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120μg/L5號標(biāo)準品150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
60μg/L4號標(biāo)準品150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
30μg/L3號標(biāo)準品150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
15μg/L2號標(biāo)準品150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
7.5μg/L1號標(biāo)準品150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

大鼠*原酶(Try)ELISA分析檢測試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

上海谷研實業(yè)有限公司作者

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