谷氨-酰胺合成酶(GS)測試盒_氨基酸代謝系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義
GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶之一,催化銨離子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺,不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,而且谷氨-酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。
谷氨-酰胺合成酶(GS)測試盒_氨基酸代謝系列
測定原理
GS在ATP和Mg2+存在下,催化銨離子和谷-氨酸合成谷氨-酰胺;谷氨-酰胺進一步轉(zhuǎn)化為γ─谷氨酰基異羥肟酸,在酸性條件下形成的絡(luò)合物在540nm處有大吸收峰,可用分光光度計測定。
所需的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液:30mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:12mL×1瓶,-20℃保存,臨用前37℃預(yù)熱20min,充分混勻,如有沉淀,靜置10min,取上清待用。
試劑二:12mL×1瓶,-20℃保存,臨用前37℃預(yù)熱20min,充分混勻,如有沉淀,靜置10min,取上清待用。
試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。用時每瓶加入5mL蒸餾水充分溶解待用。
試劑四:15mL×1瓶,4℃保存。
樣本測定的準備
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。