豬腎近曲小管上皮細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。

2.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件*。若由于培養(yǎng)條件不*而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3.用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過(guò)夜，隔天再取出觀(guān)察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們

4.靜置細(xì)胞貼壁后，請(qǐng)將細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL維持細(xì)胞正常培養(yǎng)，待細(xì)胞匯合度 90%左右時(shí)正常傳代。

5.請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時(shí)可以一定比例和客戶(hù)自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

6.建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前 3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通交流。

細(xì)胞名稱(chēng)：豬腎近曲小管上皮細(xì)胞
培養(yǎng)條件：M199+3% FBS/DMEM+F12+12%FBS
英文簡(jiǎn)稱(chēng)：LLC-PK1
種屬：豬

1.取出細(xì)胞瓶,75%酒精消毒后拆下封口膜，放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2.待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
3.細(xì)胞傳代：吸出細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)基，用 PBS清洗細(xì)胞一次。

4.加入0.125%胰蛋白酶消化液約 1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃消化   3min左右；顯微鏡下
觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化。

5.用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2或  1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的
*培養(yǎng)基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

6.待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀(guān)察，每隔 2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。

由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

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