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人apelin13(AP13)ELISA檢測試劑盒

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所  在  地深圳市

更新時間:2016-07-11 11:38:55瀏覽次數:173次

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人apelin13(AP13)ELISA檢測試劑盒
?產品規(guī)格:96T(人份)/48T(人份)
?產品包裝:盒(KIT)(含試劑+酶聯(lián)板+覆膜等)
?適用范圍:實驗結果僅供科研參考,不推薦用于臨床診斷結果。
?有效期: 4 個月(4℃);8 個月(-20℃)。

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人apelin13(AP13)ELISA檢測試劑盒標本的處理 
可用作 ELISA 測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、 細胞培養(yǎng)上清、細胞、組織等均可作標本以測定其中某種成份。有些標本可直接進行測定,有些 則需經預處理。 
● 血清: 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。收集上清。如 有沉淀形成,應再次離心。 
● 血漿: 
應根據試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入 10 %( v/v )抗凝劑 ( 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分鐘后,離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形 成,應再次離心。 
●尿液、胸腹水、腦脊液: 
用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。如有沉淀形成, 應再次離心。
●細胞培養(yǎng)上清:
 檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集 上清。檢測細胞內的 成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。 
●細胞: 
檢測細胞的成份時,對于貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加 入適量裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞10 秒后,細胞 就會被裂解。對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適 量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉 淀。如果細胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5 分鐘,取上 清,即可進行后續(xù)操作。 
●組織標本: 
切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制 劑。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉 / 分)。仔細收集 上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

的基本原理
就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反應,并通過酶催化底物發(fā)生化學變化將抗原抗體反應通過顏色的形式顯現(xiàn)出來。
(1)將抗原抗體反應固相化:即試驗中的包被環(huán)節(jié),使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結構,保持其生物學特性和免疫學活性;
(2)封閉:固相吸附蛋白是非特異性的,在包被目的免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力,為了保障抗原抗體反應的特異性,因此,包被剩余的固相表面應該用抗原抗體反應無關蛋白封閉。一般認為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
(3)抗原抗體反應:抗原或抗體在適當的介質下可進行特異的抗原抗體反應。 (4)酶反應:酶可以通過共價鍵與抗原或抗體連接形成結合物,當抗原抗體反應的時候,被檢測靶目標中也結合了酶分子。
(5)ELISA試劑盒底物反應:結合在抗原抗體中的酶分子,可以促使底物發(fā)生顏色反應,檢測人員可以裸眼觀察,可以通過顏色來判定是否有免疫反應的存在,通過顏色的深淺判斷標本中相應抗原或抗體的含量,也可借用酶標儀在適當的波長讀取吸光度值。

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