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人白介素-5(IL-5)ELISA檢測(cè)試劑盒一般的生物標(biāo)本包括有:
血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物等,一般為無(wú)菌操作,低溫保存(-80℃、液氮)
一.如果采集的實(shí)質(zhì)器官則要求:
1、 器官實(shí)質(zhì)不能太小
2、 以采集實(shí)質(zhì)性病灶區(qū)為佳:如淋巴結(jié)、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳
3、 同一病例裝入同一容器,并做好標(biāo)記
4、 應(yīng)在0-8℃的低溫儲(chǔ)存和運(yùn)輸
5、 實(shí)質(zhì)性器官的處理:
5.1、取實(shí)質(zhì)性器官約0.5mg左右,充分剪碎或研磨
5.2、加入約500ul的/生鹽水,充分混勻
5.3、離心5000rmp x10min,去上清
5.4、-20℃保存,作為待檢標(biāo)本(切勿反復(fù)凍融)
二.體液(常見(jiàn)的包括血清、血漿、唾液以及尿液等)的處理方式
1、血液包括血漿和血清,它們的主要區(qū)別就是:血清凝血而血漿不凝血,所以它們的處理方式也就不一樣
1.1、采集血漿時(shí)一般不加抗凝劑(主要為枸櫞酸鹽和檸檬酸鹽),采集后立即離心800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />1.2、如要采集血清,一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室溫或4℃靜置半小時(shí)后,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />2、胃液和唾液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般飯后半小時(shí)內(nèi)不易采集,因?yàn)閯傔M(jìn)食的唾液中富含豐富的唾液淀粉酶,的采集的時(shí)間時(shí)空腹采集;
3、尿液的采集方式基本和唾液一樣的,即現(xiàn)采現(xiàn)用,但是一般隔夜尿不采集;
4、組織提取液如肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmp x 5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />三、糞便以及天然孔排泄物:采集后一般現(xiàn)用/生鹽水溶解,充分混勻,800-1000rmp x 5min分離,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆茫?br />四、活檢組織一般進(jìn)行穿刺檢測(cè),zui常見(jiàn)的就是肝活檢,像病毒性肝炎、脂肪肝、各種類型的肝硬化等進(jìn)行活檢簡(jiǎn)單方便、準(zhǔn)確。
五、表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)
(一)真核表達(dá)產(chǎn)物
1、 細(xì)胞上清(分泌性蛋白)
1.2、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
1.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml離心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
2、 細(xì)胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、貼壁細(xì)胞或半貼壁,直接將細(xì)胞培養(yǎng)上清吸出,然后用001M (pH 7.4)將細(xì)胞吹下至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
2.2、不貼壁細(xì)胞,將培養(yǎng)基和細(xì)胞轉(zhuǎn)移至10ml離心管,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至另一10ml離心管中,0.01M (pH 7.4)重懸,500-800rmp x10min,棄上清,沉淀移至1.5ml離心管中, DDW重懸,置冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
(二)原核(大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng))表達(dá)產(chǎn)物
1、表達(dá)上清(非融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
2、菌體裂解物(融合性蛋白)
直接將培養(yǎng)物和上清吸出,10000rmp x10min,棄上清,沉淀用洗一遍,500-800rmp x10min,棄上清,DDW重懸沉淀,冰水浴中用超聲波裂解儀進(jìn)行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作為標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),如有需要可進(jìn)行透析或純化處理;
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