人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）ELISA檢測(cè)試劑盒子科生物現(xiàn)貨供應(yīng)，子科生物專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)研發(fā)經(jīng)營(yíng)穩(wěn)定、優(yōu)質(zhì)、高效、實(shí)用的ELISA試劑盒，本公司可以提供ELISA試劑盒免費(fèi)代測(cè)，ELISA試劑盒批發(fā)價(jià)零售，是ELISA試劑盒專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)廠家，并代理各大進(jìn)口原裝品牌ELISA試劑盒，貨期短，*，原裝正品，！報(bào)價(jià)，檢測(cè)原理，使用說(shuō)明書(shū)，咨詢(xún)免費(fèi)索要！

人抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）ELISA檢測(cè)試劑盒的基本原理
就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反應(yīng)，并通過(guò)酶催化底物發(fā)生化學(xué)變化將抗原抗體反應(yīng)通過(guò)顏色的形式顯現(xiàn)出來(lái)。
（1）將抗原抗體反應(yīng)固相化：即試驗(yàn)中的包被環(huán)節(jié)，使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機(jī)制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團(tuán)可以無(wú)選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結(jié)構(gòu)，保持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性；
（2）封閉：固相吸附蛋白是非特異性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，為了保障抗原抗體反應(yīng)的特異性，因此，包被剩余的固相表面應(yīng)該用抗原抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)蛋白封閉。一般認(rèn)為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
（3）抗原抗體反應(yīng)：抗原或抗體在適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反應(yīng)。 （4）酶反應(yīng)：酶可以通過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體連接形成結(jié)合物，當(dāng)抗原抗體反應(yīng)的時(shí)候，被檢測(cè)靶目標(biāo)中也結(jié)合了酶分子。
（5）ELISA試劑盒底物反應(yīng)：結(jié)合在抗原抗體中的酶分子，可以促使底物發(fā)生顏色反應(yīng)，檢測(cè)人員可以裸眼觀察，可以通過(guò)顏色來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在，通過(guò)顏色的深淺判斷標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的含量，也可借用酶標(biāo)儀在適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)讀取吸光度值。

實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟：
1．確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目，并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9；做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。 
2．將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中，1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清，直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。 
3．酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng) 90 分鐘。 
4．反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體；或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體，再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。 
5．將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。（TMB 空白顯色孔除 外）。37℃反應(yīng) 60 分鐘。 
6． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次，每次浸泡 1 分鐘左右。 
7．將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入（TMB 空白顯色孔除外）。37℃反應(yīng) 30 分鐘。 
8． 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次，每次浸泡 1-2 分鐘左右。 
9．按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液，37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 （注意：顯色時(shí)間供參考，因用戶(hù)實(shí)驗(yàn)室條件差異，顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后 3-4 孔差別不明顯）。 
10．按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。 
11．用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。

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