血管位蛋白樣1/血管生成素樣蛋白-1抗體價(jià)格

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抗體(antibody)指機(jī)體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B淋巴細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。

抗體與免疫球蛋白的區(qū)別

zui初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統(tǒng)稱為丙種(γ)球蛋白。后來發(fā)現(xiàn)，抗體并不都在γ區(qū);并且位于γ區(qū)的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。

1964年，世界衛(wèi)生組織舉行專門會(huì)議，將具有抗體活性以及與抗體相關(guān)的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白(Ig)，如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因而免疫球蛋白是結(jié)構(gòu)化學(xué)的概念，而抗體是生物學(xué)功能的概念?？梢哉f，所有抗體都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體。

生物活性

(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。

(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。

(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。

(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。

抗體結(jié)構(gòu)

抗體是具有4條多肽鏈的對(duì)稱結(jié)構(gòu)，其中2條較長(zhǎng)、相對(duì)分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對(duì)分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵聯(lián)結(jié)形成一個(gè)由4條多肽鏈構(gòu)成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種，重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。整個(gè)抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。在給定的物種中，不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列。可變區(qū)位于"Y"的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強(qiáng)烈，這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū)。高變區(qū)位于分子表面，zui多由17個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成，少則只有2 ～ 3個(gè)。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結(jié)合抗原抗原的特異性。一個(gè)抗體分子上的兩個(gè)抗原結(jié)合部位是相同的，位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部稱結(jié)晶片段(crystalline fragment,FC)，糖結(jié)合在FC 上。

抗體基因重排

抗體的L鏈?zhǔn)怯蒀、V、J三個(gè)基因簇編碼的，H鏈由C、V、D、J四個(gè)基因簇編碼的。V是編碼可變區(qū)，有300個(gè)種類;D編碼高變區(qū),有15 ～ 20個(gè)種類;J編碼連接V、C的結(jié)合區(qū)，有4～5個(gè)種類;C編碼恒定區(qū)，僅有一種。這些外顯子通過多種多樣的重排，所合成出的肽鏈，還要再進(jìn)一步進(jìn)行L和H鏈組合，這樣zui后生成的抗體種類就非常多了?？贵w基因重排是發(fā)生在淋巴細(xì)胞分化的時(shí)候。

抗體的功能

抗體的主要功能是與抗原(包括外來的和自身的)相結(jié)合，從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲等異物，中和它們所釋放的毒素或清除某些自身抗原，使機(jī)體保持正常平衡，但有時(shí)也會(huì)對(duì)機(jī)體造成病理性損害，如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產(chǎn)生，對(duì)人體可造成危害。

抗體的分類

(1)按作用對(duì)象，可將其分為抗毒素、抗菌抗體、抗病毒抗體和親細(xì)胞抗體

 (2)按理化性質(zhì)和生物學(xué)功能，可將其分為IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五類。

IgM抗體是免疫應(yīng)答中首先分泌的抗體。它們?cè)谂c抗原結(jié)合后啟動(dòng)補(bǔ)體的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。它們還把入侵者相互連接起來，聚成一堆便于巨噬細(xì)胞的吞噬;

IgG抗體激活補(bǔ)體，中和多種毒素。IgG持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)。

IgA抗體進(jìn)入身體的黏膜表面，包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜，中和感染因子。還可以通過母乳的初乳把這種抗體輸送到新生兒的消化道黏膜中，是在母乳中含量zui多，zui為重要的一類抗體;

IgE抗體的尾部與嗜堿細(xì)胞、肥大細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)合。當(dāng)抗體與抗原結(jié)合后，嗜堿細(xì)胞與肥大細(xì)胞釋放組織胺一類物質(zhì)促進(jìn)炎癥的發(fā)展。這也是引發(fā)速發(fā)型過敏反應(yīng)的抗體;

IgD抗體的作用還不太清楚。它們主要出現(xiàn)在成熟的B淋巴細(xì)胞表面上，可能與B細(xì)胞的分化有關(guān)。(IgD于1995年從人骨髓瘤蛋白中發(fā)現(xiàn)，分子量為175kD，主要由扁桃體、脾等處漿細(xì)胞產(chǎn)生，人血清中IgD濃度為3～40μg/ml,不到血清總Ig的1%，在個(gè)體發(fā)育中合成較晚。IgD鉸鏈區(qū)很長(zhǎng)，且對(duì)蛋白酶水解敏感，因此IgD半衰期很短，僅2.8天。血清中IgD確切的免疫功能尚不清楚。在B細(xì)胞分化到成熟B細(xì)胞階段，除了表達(dá)SmIgD，抗原刺激后表現(xiàn)為免疫耐受。成熟B細(xì)胞活化后或者活化后或者變成記憶B細(xì)胞時(shí)，SmIgD逐漸消失。)

(3)按與抗原結(jié)合后是否出現(xiàn)可見反應(yīng)，可將其分為：在介質(zhì)參與下出現(xiàn)可見結(jié)合反應(yīng)的*抗體，即通常所說的抗體，以及不出現(xiàn)可見反應(yīng)，但能阻抑抗原與其相應(yīng)的*抗體結(jié)合的不*抗體。

(4)按抗體的來源，可將其分為天然抗體和免疫抗體。

抗體就是免疫球蛋白，是改變了的球蛋白分子。由特異性抗原刺激產(chǎn)生，抗體的產(chǎn)生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細(xì)胞相互作用，使B使淋巴分化增殖而形成漿細(xì)胞，漿細(xì)胞可產(chǎn)生分泌抗體。（三九網(wǎng)）

抗體的選擇和保存

當(dāng)我們要檢測(cè)目的蛋白在組織中表達(dá)情況的時(shí)候，如何選擇適合我們實(shí)驗(yàn)需要的抗體，并恰當(dāng)保存使用，是每個(gè)科研人員需要細(xì)心考慮的?？贵w種類繁多，品牌眾多，技術(shù)參數(shù)不一，價(jià)格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購買到高質(zhì)量?jī)r(jià)格合適的抗體，并準(zhǔn)確地做出我們想要的結(jié)果，其中有很多細(xì)節(jié)需要注意。

怎樣選擇適合你實(shí)驗(yàn)需要的抗體

1. 一抗選擇要點(diǎn)

（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。

（2）確定你的實(shí)驗(yàn)類型，ELISA，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過適用于何種實(shí)驗(yàn)的類型，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，請(qǐng)根據(jù)說明書列出的已驗(yàn)證的類型來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。

（3）確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種物種實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)根據(jù)說明書列出已驗(yàn)證的種屬來選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。對(duì)于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)，例如：檢測(cè)小鼠樣本蛋白，則不應(yīng)選擇小鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測(cè)分子（酶、熒光素、*等）的抗兔IgG。

（4）樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體，待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過程中是否會(huì)變性，蛋白空間構(gòu)象的改變，會(huì)影響抗體的免疫親和反應(yīng)。抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來，其中的免疫原包括：全長(zhǎng)蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測(cè)的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS 流式檢測(cè)活細(xì)胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。

（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，但親和力相對(duì)小，檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

(6)單克隆與多克隆抗體的區(qū)別

         單克隆與多克隆抗體的區(qū)別這首先要從抗體的產(chǎn)生來探討。把某一抗原免疫某種動(dòng)物而得到單抗或多抗。如果用經(jīng)免疫過的動(dòng)物的脾細(xì)胞獲得雜交瘤細(xì)胞，則得到單克隆抗體，如果用動(dòng)物的血清，則得到多克隆抗體。
        但從理論上說，這些抗體都應(yīng)針對(duì)抗原來自的動(dòng)物，例如如果用人蛋白抗原免疫小鼠，則這些抗體為鼠抗人。由于一個(gè)大蛋白分子表面具有多種抗原決定簇，因此，免疫動(dòng)物后，這些不同的決定簇分別誘導(dǎo)動(dòng)物產(chǎn)生不同的抗體，每種抗體的特異性不同。單抗是有單個(gè)細(xì)胞起源的細(xì)胞克隆分泌的，所以只針對(duì)蛋白抗原的單一抗原決定簇，而多抗是有多個(gè)不同克隆的B細(xì)胞產(chǎn)生的，是多種細(xì)胞的混合物，但其中的每一種抗體也只是針對(duì)一種決定簇。多抗混合物中的每一抗體與蛋白抗原結(jié)合的能力是不同的，因此用多抗做實(shí)驗(yàn)與用單抗可有其優(yōu)勢(shì)，那就是能確?？贵w與抗原結(jié)合從而顯示抗原信息。但也有其缺點(diǎn)，那就是交叉反應(yīng)，往往造成假陽性。

2. 抗選擇要點(diǎn)

（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗，以與后面的SP結(jié)合反應(yīng)，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標(biāo)記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。

抗體的穩(wěn)定性

1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界*進(jìn)化的結(jié)果?？贵w是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進(jìn)化篩選的結(jié)果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。

2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時(shí)間溫度達(dá)到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊，保持應(yīng)有的活性。

3. 抗體的純度。采用*的抗體純化技術(shù)，確保抗體產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。

怎樣確定抗體購買渠道和品牌

國外*抗體品牌的質(zhì)量一般沒問題，但價(jià)格較貴，而且很多抗體品牌本身不生產(chǎn)抗體，所以能找到OEM抗體生產(chǎn)商生產(chǎn)的*抗體，如美國的ProSci公司，大部分常用抗體都可以在ProSci上查找到，同樣一支抗體能少花費(fèi)1000元，對(duì)于一個(gè)普通實(shí)驗(yàn)室來說，那將節(jié)約非常多的科研經(jīng)費(fèi)，而且ProSci會(huì)提供信號(hào)通路的小包裝抗體作為一個(gè)試劑盒，這樣*方便了用戶，特別是經(jīng)費(fèi)不是很充足的用戶。隨著網(wǎng)絡(luò)技術(shù)的越來越普及，我們自己就可以通過國內(nèi)外的相關(guān)來檢索

怎樣保存已獲得的抗體

抗體無論是保存還是運(yùn)輸都應(yīng)盡可能地避免反復(fù)凍融，收到抗體后請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，對(duì)抗體進(jìn)行分裝，避免同一管抗體反復(fù)凍融（反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體空間結(jié)構(gòu)變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力）?？贵w保存得當(dāng)與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當(dāng)，抗體活性大部分都可以維持?jǐn)?shù)年。請(qǐng)謹(jǐn)記，無論何時(shí)請(qǐng)按照說明書*的保存條件正確處理和保存抗體。

1. 收到抗體后，請(qǐng)務(wù)必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，（無論是液體還是凍干粉狀態(tài)），再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請(qǐng)延長(zhǎng)離心時(shí)間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來）?？贵w一般使用特制的儲(chǔ)存管，只有在12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來（即使是在10000rpm離心也會(huì)離心不*，導(dǎo)致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）。

2. 對(duì)于ProSci大部分抗體，比較合適的保存方式是，分裝后保存在-20℃或者-80℃。

（1）對(duì)絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃就*足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會(huì)更好。

（2）分裝可以zui大程度的降低反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害，同時(shí)也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。

（3）分裝的量以一次實(shí)驗(yàn)用完為好，zui少不能少于10ul每份。因?yàn)榉盅b體積越小，抗體的濃度越可能會(huì)受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。

（4）復(fù)融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來。

（5）抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，4℃保存盡量不要超過1天。

（6）避免將抗體保存在自動(dòng)除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復(fù)凍融。

3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對(duì)抗體活性沒有影響。

4. 大部分抗體的運(yùn)輸條件：一般的運(yùn)輸過程需要1~2周的時(shí)間，所以是在低溫4℃的條件下來完成的。

4℃運(yùn)輸zui主要的目的是為了避免反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害（如果使用干冰運(yùn)輸，那么收到時(shí)抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過程），所以運(yùn)輸過程中避免干冰運(yùn)輸。

關(guān)于*（sodium azide）的使用：

為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度0.02% (w/v)）。ProSci的絕大部分抗體已經(jīng)含有了0.02％-0.05%的*，在說明書的儲(chǔ)存緩沖液中有標(biāo)明。

注：*的去除方式

可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除，IgG的分子量是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除。