活化復制因子2抗體價格

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抗體(antibody)指機體的免疫系統(tǒng)在抗原刺激下，由B淋巴細胞分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應抗原發(fā)生特異性結合反應的免疫球蛋白。

抗體與免疫球蛋白的區(qū)別

zui初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統(tǒng)稱為丙種(γ)球蛋白。后來發(fā)現(xiàn)，抗體并不都在γ區(qū);并且位于γ區(qū)的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。

1964年，世界衛(wèi)生組織舉行專門會議，將具有抗體活性以及與抗體相關的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白(Ig)，如骨髓瘤蛋白，巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因而免疫球蛋白是結構化學的概念，而抗體是生物學功能的概念?？梢哉f，所有抗體都是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗體。

生物活性

(1)結合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合，在體內(nèi)導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應?？贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。

(2)激活補體：抗體與相應抗原結合后，借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。

(3)結合細胞：不同類別的免疫球蛋白，可結合不同種的細胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應答。

(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。

抗體結構

抗體是具有4條多肽鏈的對稱結構，其中2條較長、相對分子量較大的相同的重鏈(H鏈);2條較短、相對分子量較小的相同的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價鍵聯(lián)結形成一個由4條多肽鏈構成的單體分子。輕鏈有κ和λ兩種，重鏈有μ、δ、γ、ε和α五種。整個抗體分子可分為恒定區(qū)和可變區(qū)兩部分。在給定的物種中，不同抗體分子的恒定區(qū)都具有相同的或幾乎相同的氨基酸序列?？勺儏^(qū)位于"Y"的兩臂末端。在可變區(qū)內(nèi)有一小部分氨基酸殘基變化特別強烈，這些氨基酸的殘基組成和排列順序更易發(fā)生變異區(qū)域稱高變區(qū)。高變區(qū)位于分子表面，zui多由17個氨基酸殘基構成，少則只有2 ～ 3個。高變區(qū)氨基酸序列決定了該抗體結合抗原抗原的特異性。一個抗體分子上的兩個抗原結合部位是相同的，位于兩臂末端稱抗原結合片段(antigen-binding fragment, Fab)。"Y"的柄部稱結晶片段(crystalline fragment,FC)，糖結合在FC 上。

抗體基因重排

抗體的L鏈是由C、V、J三個基因簇編碼的，H鏈由C、V、D、J四個基因簇編碼的。V是編碼可變區(qū)，有300個種類;D編碼高變區(qū),有15 ～ 20個種類;J編碼連接V、C的結合區(qū)，有4～5個種類;C編碼恒定區(qū)，僅有一種。這些外顯子通過多種多樣的重排，所合成出的肽鏈，還要再進一步進行L和H鏈組合，這樣zui后生成的抗體種類就非常多了?？贵w基因重排是發(fā)生在淋巴細胞分化的時候。

抗體的功能

抗體的主要功能是與抗原(包括外來的和自身的)相結合，從而有效地清除侵入機體內(nèi)的微生物、寄生蟲等異物，中和它們所釋放的毒素或清除某些自身抗原，使機體保持正常平衡，但有時也會對機體造成病理性損害，如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產(chǎn)生，對人體可造成危害。

抗體的分類

(1)按作用對象，可將其分為抗毒素、抗菌抗體、抗病毒抗體和親細胞抗體

 (2)按理化性質(zhì)和生物學功能，可將其分為IgM、IgG、IgA、IgE、IgD五類。

IgM抗體是免疫應答中首先分泌的抗體。它們在與抗原結合后啟動補體的級聯(lián)反應。它們還把入侵者相互連接起來，聚成一堆便于巨噬細胞的吞噬;

IgG抗體激活補體，中和多種毒素。IgG持續(xù)的時間長。

IgA抗體進入身體的黏膜表面，包括呼吸、消化、生殖等管道的黏膜，中和感染因子。還可以通過母乳的初乳把這種抗體輸送到新生兒的消化道黏膜中，是在母乳中含量zui多，zui為重要的一類抗體;

IgE抗體的尾部與嗜堿細胞、肥大細胞的細胞膜結合。當抗體與抗原結合后，嗜堿細胞與肥大細胞釋放組織胺一類物質(zhì)促進炎癥的發(fā)展。這也是引發(fā)速發(fā)型過敏反應的抗體;

IgD抗體的作用還不太清楚。它們主要出現(xiàn)在成熟的B淋巴細胞表面上，可能與B細胞的分化有關。(IgD于1995年從人骨髓瘤蛋白中發(fā)現(xiàn)，分子量為175kD，主要由扁桃體、脾等處漿細胞產(chǎn)生，人血清中IgD濃度為3～40μg/ml,不到血清總Ig的1%，在個體發(fā)育中合成較晚。IgD鉸鏈區(qū)很長，且對蛋白酶水解敏感，因此IgD半衰期很短，僅2.8天。血清中IgD確切的免疫功能尚不清楚。在B細胞分化到成熟B細胞階段，除了表達SmIgD，抗原刺激后表現(xiàn)為免疫耐受。成熟B細胞活化后或者活化后或者變成記憶B細胞時，SmIgD逐漸消失。)

(3)按與抗原結合后是否出現(xiàn)可見反應，可將其分為：在介質(zhì)參與下出現(xiàn)可見結合反應的*抗體，即通常所說的抗體，以及不出現(xiàn)可見反應，但能阻抑抗原與其相應的*抗體結合的不*抗體。

(4)按抗體的來源，可將其分為天然抗體和免疫抗體。

抗體就是免疫球蛋白，是改變了的球蛋白分子。由特異性抗原刺激產(chǎn)生，抗體的產(chǎn)生是由于抗原侵入人體后引起各種免疫細胞相互作用，使B使淋巴分化增殖而形成漿細胞，漿細胞可產(chǎn)生分泌抗體。（三九網(wǎng)）

抗體的選擇和保存

當我們要檢測目的蛋白在組織中表達情況的時候，如何選擇適合我們實驗需要的抗體，并恰當保存使用，是每個科研人員需要細心考慮的?？贵w種類繁多，品牌眾多，技術參數(shù)不一，價格和質(zhì)量更是相差甚大，如何購買到高質(zhì)量價格合適的抗體，并準確地做出我們想要的結果，其中有很多細節(jié)需要注意。

怎樣選擇適合你實驗需要的抗體

1. 一抗選擇要點

（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息。

（2）確定你的實驗類型，ELISA，WB，IHC，ICC，還是FACS。一般抗體的說明書都會列出該抗體經(jīng)驗證過適用于何種實驗的類型，如果抗體說明書沒有提及的應用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種實驗驗證，請根據(jù)說明書列出的已驗證的類型來選擇適合你實驗的抗體。

（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat。一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種物種實驗，請根據(jù)說明書列出已驗證的種屬來選擇適合你實驗的抗體。對于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應，例如：檢測小鼠樣本蛋白，則不應選擇小鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子（酶、熒光素、*等）的抗兔IgG。

（4）樣本蛋白的結構性質(zhì)。了解樣本蛋白的結構性質(zhì)有助于選擇zui合適的抗體，待測樣本蛋白的結構域和樣本在提取和處理過程中是否會變性，蛋白空間構象的改變，會影響抗體的免疫親和反應。抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來，其中的免疫原包括：全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機體（如：細菌）或細胞，抗體說明書一般都有免疫原的描述，如果打算檢測的是蛋白片斷或一種特殊的同型物或蛋白全長的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。如果打算用FACS 流式檢測活細胞的表面蛋白，則需要選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。

（5）單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

(6)單克隆與多克隆抗體的區(qū)別

         單克隆與多克隆抗體的區(qū)別這首先要從抗體的產(chǎn)生來探討。把某一抗原免疫某種動物而得到單抗或多抗。如果用經(jīng)免疫過的動物的脾細胞獲得雜交瘤細胞，則得到單克隆抗體，如果用動物的血清，則得到多克隆抗體。
        但從理論上說，這些抗體都應針對抗原來自的動物，例如如果用人蛋白抗原免疫小鼠，則這些抗體為鼠抗人。由于一個大蛋白分子表面具有多種抗原決定簇，因此，免疫動物后，這些不同的決定簇分別誘導動物產(chǎn)生不同的抗體，每種抗體的特異性不同。單抗是有單個細胞起源的細胞克隆分泌的，所以只針對蛋白抗原的單一抗原決定簇，而多抗是有多個不同克隆的B細胞產(chǎn)生的，是多種細胞的混合物，但其中的每一種抗體也只是針對一種決定簇。多抗混合物中的每一抗體與蛋白抗原結合的能力是不同的，因此用多抗做實驗與用單抗可有其優(yōu)勢，那就是能確?？贵w與抗原結合從而顯示抗原信息。但也有其缺點，那就是交叉反應，往往造成假陽性。

2. 抗選擇要點

（1）種屬來源。主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源，如一抗是小鼠來源，那二抗就買抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。

（2）標記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標記的二抗，以與后面的SP結合反應，而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗，如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。

抗體的穩(wěn)定性

1. 抗體的穩(wěn)定性是自然界*進化的結果?？贵w是免疫系統(tǒng)中zui重要的分子之一，其穩(wěn)定性是自然進化篩選的結果。在眾多物種中，抗體分子形成了保守而穩(wěn)定的結構。

2. 抗體分子的高Tm值。在室溫下，甚至短時間溫度達到50-60℃，抗體分子都能維持正確折疊，保持應有的活性。

3. 抗體的純度。采用*的抗體純化技術，確?？贵w產(chǎn)品的高純度，保障其抗體產(chǎn)品的穩(wěn)定性。

4. 抗體的濃度。高濃度的抗體產(chǎn)品可減少容器表面吸附造成的物質(zhì)損失，高濃度的抗體穩(wěn)定性更好，抗體產(chǎn)品中93%的濃度大于0.5mg/ml。

怎樣確定抗體購買渠道和品牌

國外*抗體品牌的質(zhì)量一般沒問題，但價格較貴，而且很多抗體品牌本身不生產(chǎn)抗體，所以能找到OEM抗體生產(chǎn)商生產(chǎn)的*抗體，如美國的ProSci公司，大部分常用抗體都可以在ProSci上查找到，同樣一支抗體能少花費1000元，對于一個普通實驗室來說，那將節(jié)約非常多的科研經(jīng)費，而且ProSci會提供信號通路的小包裝抗體作為一個試劑盒，這樣*方便了用戶，特別是經(jīng)費不是很充足的用戶。隨著網(wǎng)絡技術的越來越普及，我們自己就可以通過國內(nèi)外的相關來檢索

怎樣保存已獲得的抗體

抗體無論是保存還是運輸都應盡可能地避免反復凍融，收到抗體后請根據(jù)實驗的需要，對抗體進行分裝，避免同一管抗體反復凍融（反復凍融會導致抗體空間結構變性，導致多聚體形成，從而降低抗體的結合能力）。抗體保存得當與否，直接決定了抗體的活性和使用效果，如果抗體保存得當，抗體活性大部分都可以維持數(shù)年。請謹記，無論何時請按照說明書*的保存條件正確處理和保存抗體。

1. 收到抗體后，請務必在4℃，12000rpm，離心3分鐘，（無論是液體還是凍干粉狀態(tài)），再打開管蓋進行分裝和保存（如果抗體體積小于50ul，請延長離心時間至5分鐘，以保證全部抗體均離心下來）。抗體一般使用特制的儲存管，只有在12000rpm離心3分鐘，才能將附著在管壁或蓋內(nèi)的抗體全部離心下來（即使是在10000rpm離心也會離心不*，導致出現(xiàn)抗體的量不足的現(xiàn)象）。

2. 對于ProSci大部分抗體，比較合適的保存方式是，分裝后保存在-20℃或者-80℃。

（1）對絕大多數(shù)抗體來說，保存在-20℃就*足夠了，沒有任何證據(jù)顯示保存在-80℃會更好。

（2）分裝可以zui大程度的降低反復凍融對抗體活性的損害，同時也降低了由于多次從同一管中吸取抗體造成的污染可能性。

（3）分裝的量以一次實驗用完為好，zui少不能少于10ul每份。因為分裝體積越小，抗體的濃度越可能會受到蒸發(fā)以及管壁吸附的影響。

（4）復融后的分裝抗體如果一次用不完，將剩余母液保存在4℃，避免再凍起來。

（5）抗體工作液應該當天配制當天用完，4℃保存盡量不要超過1天。

（6）避免將抗體保存在自動除霜冰箱中，將抗體保存在冰箱里層，避免溫度變化造成反復凍融。

3. 大部分抗體收到后4℃短暫保存1~2周對抗體活性沒有影響。

4. 大部分抗體的運輸條件：一般的運輸過程需要1~2周的時間，所以是在低溫4℃的條件下來完成的。

4℃運輸zui主要的目的是為了避免反復凍融對抗體活性的損害（如果使用干冰運輸，那么收到時抗體是凍起來的，為了分裝就需要解凍，這就多了一次凍融的過程），所以運輸過程中避免干冰運輸。

關于*（sodium azide）的使用：

為了防止微生物污染，*經(jīng)常被加入到抗體中（終濃度0.02% (w/v)）。ProSci的絕大部分抗體已經(jīng)含有了0.02％-0.05%的*，在說明書的儲存緩沖液中有標明。

注：*的去除方式

可以通過凝膠電泳或過濾的方式去除，IgG的分子量是150kDa（IgM約600kDa）；*的分子量只有65Da，使用截留分子量為14kDa的濾膜即可將*從抗體中去除。