上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格,ELISA試劑盒報價 |
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參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間:2021-07-16 11:14:25瀏覽次數(shù):229
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:大豆內(nèi)源基因(Lectin)定性PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:CP100168
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品分類:PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
?
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
釀酒酵母9號染色體開放閱讀框61抗體Human ALDOA(Aldolase A, Fructose Bisphosphate) ELISA Kit人可溶性胸苷激酶1(TK1)免疫試劑盒
黑曲霉C末端結(jié)合蛋白2抗體Human Anti-AChR(Anti-Acetylcholine Receptor Antibody) ELISA Kit人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)免疫試劑盒
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缺陷短波單胞菌胰輔脂酶抗體Human AMPK(Phosphorylated Adenosine Monophosphate Activated Protein Kinase) ELISA Kit人可溶性Endoglin(sENG/sCD105)免疫試劑盒
無17號染色體開放閱讀框104抗體Human ADRP(Adipose Differentiation Related Protein) ELISA Kit人可溶性CD86(B7-2/sCD86)免疫試劑盒
靈芝(紅芝,赤芝)(可訂購)卡因和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄蛋白抗體Human A-GHR(Acylated Ghrelin) ELISA Kit人可溶性CD80(sCD80)免疫試劑盒
孟氏假單胞菌富半肝素結(jié)合蛋白61抗體Human AGGF1(Angiogenic Factor with G Patch and FHA Domains 1) ELISA Kit人可溶性CD44變體9(sCD44-v9)免疫試劑盒
孢吸水鏈霉菌2號染色體開放閱讀框65抗體Human his(Histamine) ELISA Kit人可溶性CD40配體(sCD40L)免疫試劑盒
白井盤多毛孢β連環(huán)蛋白樣蛋白1抗體Human his(Histamine) ELISA Kit人可溶性CD40免疫試劑盒
大豆內(nèi)源基因(Lectin)定性PCR檢測試劑盒北極海單胞菌Marinomonas│arctica 質(zhì)量規(guī)格:≥160 CDU/mg,Sigma分裝蛋白基因產(chǎn)物9.5試劑盒皂皮酸
枯草芽孢桿菌枯草亞種Bacillus│subtilis subsp. subtilis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR蛋白二硫化物異構(gòu)酶A3試劑盒美商陸酸
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%蛋白S試劑盒介芬
胎兒別樣謝瓦氏菌Alishewanella│fetalis 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR蛋白C試劑盒甜菊
乳酒假絲酵母Candida│kefyr 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR蛋白ATP1B4試劑盒山竹子素
泊庫島食烷菌Alcanivorax│borkumensis 質(zhì)量規(guī)格:AR蛋白試劑盒異桑葉生物堿
擬諾卡氏菌Nocardiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,AR蛋白 DJ-1試劑盒依洛替康
五通橋毛霉Mucor│wutungkiao 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,AR蛋氨酸-R-亞砜還原酶 B2,線粒體試劑盒洋地黃苷
球孢鏈霉菌球孢亞種Streptomyces│globisporus subsp. globisporus (Krassilnikov) Waks 質(zhì)量規(guī)格:BR彈性蛋白酶2,中性粒試劑盒纖精酮
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管,分別為6,5,4,3,2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭,從6號管中取5 μL溶液到5號管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭,從5號管中取5 μL溶液到4號管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。