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操作流程如下：

（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。

（2）酶標板置4℃，包被過夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。

（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。

我司提供免費代測服務，凡購買我司試劑盒的用戶，只收取試劑盒的費用,其他輔助試劑全部免費。我們將根據(jù)實驗工作量和難易程度，雙方協(xié)定實驗周期，保質(zhì)保量完成委托實驗，并將實驗結(jié)果和材料用特快專遞免費寄送到您手中。

從標本收集、保存、預試驗、實驗、數(shù)據(jù)分析等全實驗過程提供完整的技術指導。

公司采用的全是進口原材料研，發(fā)靈敏性高，高效性，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強，無效包退包換，公司提供免費代測服務，各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全，質(zhì)量可靠。

實驗室注意事項：

1、所有試劑不能與皮膚直接接觸。

2、務必使用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不準用同一種工具同時連續(xù)取用多種試劑。

3、取完一種試劑后，應將工具洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。

4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。

5、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)。

實驗標準品圖：

40 ng/L，5號標準品，150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

20 ng/L，4號標準品，150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

10 ng/L，3號標準品，150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

5 ng/L，2號標準品，150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

2.5 ng/L，1號標準品，150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

標本的采集與保存：

1、血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2 小時或4oC 過夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即

可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，

取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

3、組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融進一步處理（超聲破碎過

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關，我司嚴格按照國家標準進行，已獲得國家承認的“三證"，每一個產(chǎn)品都有對應的批號，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進行測定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應微孔內(nèi)的溫度較快地達到所需的溫度，以滿足后面的測定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測抗原時，可用加入到標本稀釋液中使RF降解；

補體的控制方法：

①用EDTA稀釋標本；

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；

2.外源性干擾因素：包括標本溶血、細菌污染、保存時間過長或凝固不全等；

控制方法：采血時規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標本時采用無菌試管，經(jīng)檢測后再低溫凍存；保存時間不宜過久，檢測時盡量采用新鮮標本；對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

N-芐氧羰基-L-天冬  99%異酸氯磺酰酯 98%Anti-ChRM3  蕈堿型乙酰受體M3抗體

N-芐氧羰基-L-纈 99%3,4-二甲氧基苯甲 98%Anti-CIDEB  促進凋亡基因抗體

N-芐氧羰基-L-亮 96%3,4-二甲氧基苯甲 ≥98%, FGanti-CIB1  鈣整合素結(jié)合蛋白1抗體

N-芐氧羰基-L-苯 98%愈創(chuàng)木酚 CP,98.0%Anti-C-jun  原癌基因蛋白/活化蛋白1抗體

N-芐氧羰基-L-谷 98%球型四氧化三鐵磁粉 100-300nmAnti-phospho-c-Jun/AP-1(Thr91+Thr93)  化原癌基因c-Jun抗體

Fmoc-L-亮 98%鄰苯二甲 ≥99%Anti-phospho-c-Jun (Ser73)  化原癌基因c-Jun抗體

Fmoc-L-異亮 99%乙酰氯 AR,98.5%Anti-phospho-c-Jun (Ser243)  化原癌基因c-Jun抗體

Fmoc-L-精 98%乙酰氯 CP,98.0%Anti-phospho-c-Jun (Thr93)  化原癌基因c-Jun抗體

PREG孕烯醇酮酶聯(lián)免疫試劑盒戊菊酯標準溶液 100μg/ml,u=3%，體：石油Anti-WDR26/FITC  熒光素標記Gβ類似蛋白WDR26抗體IgG豬白血病抑制因子(LIF)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

戊菊酯標準溶液 10μg/ml,u=5%，體：石油Anti-WEE1 protein/FITC  熒光素標記WEE1蛋白抗體IgG豬抗存活素抗體(Anti-Surv)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

惡唑酮菌 分析標準品，98.5%Anti-Wnt1/FITC  熒光素標記信號通路Wnt1抗體IgG豬Rho關聯(lián)卷曲螺旋蛋白激2(Rock-2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

氟蟲脲 分析標準品，98%Anti-Wnt2B/FITC  熒光素標記信號通路Wnt2B抗體IgG豬伴侶蛋白10(CPN10)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

氟磺草 分析標準品，99.5%Anti-Wnt3a/FITC  熒光素標記信號通路Wnt3a抗體IgG豬通用轉(zhuǎn)錄因子II F肽1(GTF2F1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

氟酰 分析標準品，99.5%Anti-WNT5A/FITC  熒光素標記信號通路Wnt5a抗體IgG豬SH2攜帶蛋白(SHC/SLP-76)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

氟硅唑 分析標準品，99.8%Anti-WNT9A/WNT14/FITC  熒光素標記信號通路Wnt9a抗體IgG豬腸三葉肽因子3(TFF3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

銳勁特 分析標準品,≥98%(HPLC)Anti-WNT10A/FITC  熒光素標記信號通路WNT10A抗體IgG豬大腸癌專一抗原2(CCSA-2)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

丁威 分析標準品，99%Anti-WRCH-1/FITC  熒光素標記WRCH1抗體IgG豬白介素3(IL-3)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

仲丁威標準溶液 100μg/ml,u=2%Anti-WWOX /FITC  熒光素標記包含氧化還原的WW域抗體IgG豬C4結(jié)合蛋白β(C4BPβ)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

仲丁威標準溶液 10μg/ml,u=6%Anti-WIG-1/FITC  熒光素標記野生型p53誘導因1抗體IgG豬α1抗胰蛋白(α1-AT)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

精乙噁唑禾草靈 分析標準品，97%Anti-WIP1/FITC  熒光素標記原癌因WIP1抗體IgG豬葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(GLUT1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

標準溶液 100mg/L，溶劑：水Anti-WNK1/FITC  熒光素標記賴氨缺陷型蛋白激1抗體IgG豬隱花色素1(CRY1)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

殺螟硫標準溶液 10μg/ml,u=3%，酮（劇品）Anti-WNK3 protein/FITC  熒光素標記絲氨/蘇氨激家族成員的因WNK3抗體IgG豬內(nèi)皮素受體A(ETRA)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒

倍硫標準溶液 100μg/ml,u=4%Anti-WNK4/FITC  熒光素標記一種新的絲氨/蘇氨激家族成員的因WNK4抗體IgG豬生長分化因子10(GDF10)聯(lián)免疫吸附測定試劑盒