上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間:2017-06-01 08:43:32瀏覽次數(shù):236
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細胞名稱 恒河猴腎細胞;MMK2
形態(tài)特性 上皮樣,多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞來源于一雌性獼猴的腎組織。2000年由昆明細胞庫建立。
培養(yǎng)條件 M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況 P3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
恒河猴腎細胞;MMK2實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后,將動物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項:
1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
EXT1 cDNA Human 人 EXT1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
KDM1A cDNA Human 人 KDM1A / KDM1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CTNNB1 cDNA Human 人 CTNNB1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CTNNB1 cDNA Human 人 CTNNB1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標(biāo)簽
KRAS cDNA Human 人 KRAS 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
IL17A cDNA Human 人 IL17A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標(biāo)簽
PTPRC cDNA Human 人 CD45 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標(biāo)簽
TNFRSF9 cDNA Human 人 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
TNFRSF9 cDNA Human 人 CD137 / 4-1BB / TNFRSF9 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
TNFRSF4 cDNA Human 人 TNFRSF4 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
EXT2 cDNA Human 人 EXT2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽
CCR7 cDNA Human 人 CCR7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
IL17A cDNA Human 人 IL17A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CSF2 cDNA Rat 大鼠 GM-CSF 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
TNFSF14 cDNA Mouse 小鼠 LIGHT / TNFSF14 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標(biāo)簽
CD36 cDNA Human 人 CD36 / SCARB3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
TNFSF13B cDNA Human 人 BAFF / TNFSF13B 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
TGFB2 cDNA Human 人 TGF-beta2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標(biāo)簽
TNRC6A cDNA Human 人 TNRC6A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標(biāo)簽
PRKD3 cDNA Human 人 PKC nu / PRKD3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
CLEC11A cDNA Mouse 小鼠 CLEC11A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
IL7 cDNA Mouse 小鼠 IL7 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
NT5E cDNA Mouse 小鼠 NT5E 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
NT5E cDNA Human 人 NT5E 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
MED1 cDNA Human 人 MED1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
FRS2 cDNA Human 人 FRS2 基因