上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-06 09:46:04瀏覽次數(shù):397
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細(xì)胞名稱 人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞;EA.hy926
形態(tài)特性 內(nèi)皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 在PEG脅迫下,將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫的A549克隆株融合,構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并以八因子相關(guān)抗原篩選。 EA.hy926已經(jīng)過(guò)100次以上的群體倍增(PDLs)。 電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器,分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成,體內(nèi)平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應(yīng)。 [PubMed: 6407019] [PubMed: 2079463]
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞;EA.hy926
實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,用剪刀剪開(kāi)皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來(lái)回搓干凈。剪開(kāi)兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來(lái)回烤一下,以助染色體更好分散和展開(kāi)。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
1)來(lái)源:膠質(zhì)瘤細(xì)胞癌
2)形態(tài):貼壁細(xì)胞
3)含量:>1x106 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:(1)干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;(2)存活細(xì)胞,收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。
人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
細(xì)胞特性
1)來(lái)源:神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣
3)含量:>1x106 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺(tái)棄去上清,加入使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。
神經(jīng)外胚層腫瘤細(xì)胞
細(xì)胞特性
1)來(lái)源:神經(jīng)外胚層
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長(zhǎng)
3)含量:>1x106 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
細(xì)胞接受后的處理:
1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉谩?nbsp;
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
細(xì)胞介紹
在PEG脅迫下,將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫的A549克隆株融合,構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株, EA.hy926。 融合子在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并以八子相關(guān)抗原篩選。 EA.hy926已經(jīng)過(guò)100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器,分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成,體內(nèi)平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應(yīng)。
細(xì)胞特性
1)來(lái)源:靜脈內(nèi)皮細(xì)胞與A549細(xì)胞株融合
2)形態(tài):梭形,貼壁生長(zhǎng)
3)含量:>1x106 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺(tái)棄去上清,加入使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。
人絨癌細(xì)胞
細(xì)胞介紹
這是一株超三倍體人類細(xì)胞株。其典型染色體數(shù)為71,發(fā)生率為34%,多倍體率為2.6%。
細(xì)胞特性
1)來(lái)源:絨毛膜癌
2)形態(tài):上皮細(xì)胞樣
3)含量:>1x106 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存:使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后,可在1000RPM,常溫條件下,離心5min后,于潔凈操作臺(tái)棄去上清,加入使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。
人胚肺成纖維細(xì)胞
細(xì)胞特性
1)來(lái)源:肺
2)形態(tài):成纖維細(xì)胞,貼壁生長(zhǎng)
3)含量:>1x106 個(gè)/mL
4)污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
細(xì)胞接受后的處理:
1)收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查是否漏液,如果漏液,請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2)請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4)如果細(xì)胞長(zhǎng)滿(90%以上)請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5)接到細(xì)胞次日,請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉谩?nbsp;
細(xì)胞用途:僅供科研使用。
人胚腎上皮包裝細(xì)胞