上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-08 13:40:25瀏覽次數(shù):417
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細(xì)胞名稱 人導(dǎo)管癌細(xì)胞;MDA-MB-435S
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 MDA-MB-435S是一種紡錘形的細(xì)胞,1976年由其親本(MDA-MB-435)中篩選得到。MDA-MB-435是從一名31歲的轉(zhuǎn)移性導(dǎo)管腺癌女性患者胸水中分離得到的。但近來(lái)證明MDA-MB-435細(xì)胞被M14黑色素瘤細(xì)胞污染。
培養(yǎng)條件 L15: Leibovitz Medium 10%FBS
傳代方法 1:3~1:6傳代;每周2~3次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:12;D16S539:13;D18S51:13,17;D19S433:14;D21S11:30;D2S1338:19,24;D3S1358:14,20;D5S818:11,12;D7S820:8,10;D8S1179:13;FGA:21;TH01:6,7;TPOX:8,11;vWA:16,18;
同工酶
染色體 55~58
使用權(quán)限 A類人導(dǎo)管癌細(xì)胞;MDA-MB-435S 實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,用剪刀剪開(kāi)皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來(lái)回搓干凈。剪開(kāi)兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來(lái)回烤一下,以助染色體更好分散和展開(kāi)。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
操作溫度:4-40℃
分離范圍:10,000-4 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測(cè)定等
中文名稱:瓊脂糖凝膠CL-2B
英文名字:Sepharose CL-2B
性狀:白色微球, 無(wú)嗅、無(wú)味
凝膠類型:凝膠過(guò)濾填料;反復(fù)交聯(lián),化學(xué)與物理性質(zhì)更加穩(wěn)定。
結(jié)構(gòu)成分:2%交聯(lián)度瓊脂糖
粒徑:60-200μm
工作PH值:3-13
操作溫度:4-40℃
分離范圍:70,000-40 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:蛋白、大分子復(fù)合物、病毒、核酸、多糖的分離、分子量測(cè)定等
中文名稱:瓊脂糖凝膠6B
英文名字:Sepharose 6B
性狀:白色微球, 無(wú)嗅、無(wú)味
凝膠類型:凝膠過(guò)濾填料,凝膠層析介質(zhì)
結(jié)構(gòu)成分:6%交聯(lián)度瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:4-9
操作溫度:4-40℃
分離范圍:10,000-4 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測(cè)定等
中文名稱:瓊脂糖凝膠4B
英文名字:Sepharose 4B
性狀:白色微球,無(wú)嗅、無(wú)味
凝膠類型:凝膠過(guò)濾填料,凝膠層析介質(zhì)
結(jié)構(gòu)成分:4%交聯(lián)度瓊脂糖
粒徑:45-165μm
工作PH值:4-9
操作溫度:4-40℃
分離范圍:70,000-20 ×106
保存條件:4-8℃
應(yīng)用:蛋白、多肽、多糖的分離、分子量測(cè)定等
中文名稱:葡聚糖凝膠LH-60
英文名字:Sephadex LH-60
應(yīng)用:利用分子篩作用,適合用有機(jī)溶劑分離嗜脂性分子,可以非常濟(jì)地大規(guī)模制備各種天然產(chǎn)物;如:類固醇、萜類、脂類以及小分子多肽等
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過(guò)濾填料,親脂型
結(jié)構(gòu)成分:交聯(lián)葡聚糖
粒徑: 100-200目
工作PH值:2-11
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:400~20000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-50;交聯(lián)葡聚糖G-50(中顆粒)
英文名字:Sephadex G-50
應(yīng)用:利用分子篩作用,進(jìn)行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測(cè)定
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過(guò)濾填料,親水型凝膠
結(jié)構(gòu)成分:交聯(lián)右旋糖酐
粒徑:細(xì)顆粒20-80μm,中顆粒50-150μm,粗顆粒100-300μm
工作PH值:2-10
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:1500-30000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-50;交聯(lián)葡聚糖G-50(粗顆粒)
英文名字:Sephadex G-50
中文名稱:葡聚糖凝膠G-25;交聯(lián)葡聚糖G-25(細(xì)顆粒)
英文名字:Sephadex G-25