上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-09 10:04:12瀏覽次數(shù):438
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公司是*的ATCC細(xì)胞供應(yīng)商,提供小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte
的報(bào)價(jià),咨詢,稱技術(shù)服務(wù),咨詢選購(gòu)。
細(xì)胞名稱 小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte
形態(tài)特性 多邊
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 利用穩(wěn)定敏感的SV40T轉(zhuǎn)染建立的條件性永生化的腎足細(xì)胞;33℃/干擾素存在條件下,細(xì)胞增殖;37℃培養(yǎng)6天以上,細(xì)胞分化;表達(dá)WT-1,對(duì)緩激肽有反應(yīng)。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS;r-IFN(r-干擾素)
傳代方法 1:3傳代;2~3天換液1次。
傳代情況 P24
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類培養(yǎng)需要滿足以下條件
1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境:首先應(yīng)保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境,即對(duì)培養(yǎng)液和所有的培養(yǎng)用具進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。
2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):細(xì)胞體外培養(yǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與體內(nèi)基本相同,需要有葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等。通常還需加入血清、血漿等一些天然成分。
3、溫度和pH:細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度一般與動(dòng)物的體溫相近。多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH為7.2~7.4。
4、氣體環(huán)境:培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2,O2是細(xì)胞代謝所必需的,CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶,將其置于含95%空氣加5% CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
操作步驟:
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育:按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染:用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍(lán)。
10. 封片:將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè),再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
人白介素16(IL-16)elisa試劑盒 Human Interleukin 16, IL-16 Elisa Kit 96T/48T
人白介素13(IL-13)elisa試劑盒 Human Interleukin 13, IL-13 Elisa Kit 96T/48T
人白介素12(IL-12/P70)elisa試劑盒 Human Interleukin 12, IL-12/P70 Elisa Kit 96T/48T
人白介素12(IL-12/P40)elisa試劑盒 Human Interleukin 12, IL-12/P40 Elisa Kit 96T/48T
人白介素11(IL-11)elisa試劑盒 Human Interleukin 11, IL-11 Elisa Kit 96T/48T
人白介素10(IL-10)elisa試劑盒 Human Interleukin 10, IL-10 Elisa Kit 96T/48T
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)elisa試劑盒 Human insulin-like growth factors binding protein 4, IGFBP-4 Elisa Kit 96T/48T
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)elisa試劑盒 Human insulin-like growth factors binding protein 3, IGFBP-3 Elisa Kit 96T/48T
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)elisa試劑盒 Human insulin-like growth factors binding protein 2, IGFBP-2 Elisa Kit 96T/48T
人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)elisa試劑盒 Human insulin-like growth factors binding protein 1, IGFBP-1 Elisa Kit 96T/48T
人胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)elisa試劑盒 Human insulin-like growth factors 2, IGF-2 Elisa Kit 96T/48T
人胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)elisa試劑盒 Human insulin-like growth factors 1, IGF-1 Elisa Kit 96T/48T
人γ干擾素(IFN-γ)elisa試劑盒 Human Interferon γ , IFN-γ Elisa Kit 96T/48T
人細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)elisa試劑盒 Human intercellular adhesion molecule 1, ICAM-1 Elisa Kit 96T/48T
人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)elisa試劑盒 Human hepatocyte growth factor, HGF Elisa Kit 96T/48T
人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)elisa試劑盒 Human Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor, GM-CSF Elisa Kit 96T/48T
人膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)elisa試劑盒 Human glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF Elisa Kit 96T/48T
人粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)elisa試劑盒 Human Granulocyte Colony Stimulating Factor, G-CSF Elisa Kit 96T/48T
人中性粒細(xì)胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)elisa試劑盒 Human neutrophil activating protein-2, NAP-2 Elisa Kit 96T/48T
人趨化因子(fractalkine/CX3CL1) elisa試劑盒 Human fractalkine/CX3CL1 Elisa Kit 96T/48T
人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(bFGF-9)elisa試劑盒 Human basic fibroblast growth factor 9, bFGF-9 Elisa Kit 96T/48T
人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)elisa試劑盒 Human basic fibroblast growth factor 6, bFGF-6 Elisa Kit 96T/48T
人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)elisa試劑盒 Human basic fibroblast growth factor 4, bFGF-4 Elisa Kit 96T/48T
人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)elisa試劑盒 Human acidic fibroblast growth factor 1, aFGF-1 Elisa Kit 96T/48T
人凋亡相關(guān)因子配體(FASL)elisa試劑盒 Human Factor-related Apoptosis ligand, FASL Elisa Kit 96T/48T
人凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)elisa試劑盒 Human Factor-related Apoptosis, FAS Elisa Kit 96T/48T
人E選擇素(E-Selectin/CD62E)elisa試劑盒 Human E-Selectin Elisa Kit 96T/48T
人嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)elisa試劑盒 Human Eotaxin 1 Elisa Kit 96T/48T
人鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)elisa試劑盒 Human eosinophil chemotactic factor, ECF Elisa Kit 96T/48T