上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |
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參考價(jià) | 面議 |
- 型號(hào) 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間:2022-03-30 10:41:24瀏覽次數(shù):190
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)定性PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):CP100146
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品分類:RT-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
?
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
平菇胰輔脂酶抗體Human HCCS(Holocytochrome C Synthase) ELISA Kit人羥甲基戊二酸單酰還原酶(HMG-CoAR)免疫試劑盒
螺卷毛殼19號(hào)染色體開放閱讀框45抗體Human HDAC2(Histone Deacetylase 2) ELISA Kit人羥甲基戊二酸單酰(HMG-CoA)免疫試劑盒
鮮綠青霉過氧化氫誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白1抗體Human GSTα4(Glutathione S Transferase Alpha 4) ELISA Kit人羥基賴正己氨酸(HLNL)免疫試劑盒
釀酒酵母核因子NFκB激活蛋白1抗體Human Hepc(Hepcidin) ELISA Kit人羥(Hyp)免疫試劑盒
米曲霉第12號(hào)染色體開放閱讀框23抗體Human GSK3α(Glycogen Synthase Kinase 3 Alpha) ELISA Kit人強(qiáng)啡肽(Dyn)免疫試劑盒
釀酒酵母γ-連環(huán)素/連接蛋白γ抗體Human GSP(Glycosylated Serum Protein) ELISA Kit人潛伏轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白2(LTBP2)免疫試劑盒
日勾維腸桿菌10號(hào)染色體開放閱讀框4抗體Human GSTα1(Glutathione S Transferase Alpha 1) ELISA Kit人潛伏膜蛋白1(LMP-1)免疫試劑盒
中國克魯維酵母10號(hào)染色體開放閱讀框47抗體Human GPI(Glucose 6 Phosphate Isomerase) ELISA Kit人前心鈉肽(Pro-ANP)免疫試劑盒
黃色短桿菌10號(hào)染色體開放閱讀框81抗體Human GPR120(G Protein Coupled Receptor 120) ELISA Kit人前纖維蛋白1抗體免疫試劑盒
猴頭菌19號(hào)染色體開放閱讀框47抗體Human GPRC5A(G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A) ELISA Kit人前纖維蛋白1免疫試劑盒
金黃殼囊孢19號(hào)染色體開放閱讀框54抗體Human GPR37(G Protein Coupled Receptor 37) ELISA Kit人前鐵調(diào)素(Pro-Hepc)免疫試劑盒
貝雷絲孢酵母N-乙酰半乳糖糖蛋白3、β-半乳糖轉(zhuǎn)移酶1抗體Human GR(Glutathione Reductase) ELISA Kit人前列腺酸性磷酸酶(PAP)免疫試劑盒
球孢白僵菌19號(hào)染色體開放閱讀框18抗體Human GIF(Gastric Intrinsic Factor) ELISA Kit人前列腺素H2(PGH2)免疫試劑盒
總狀毛霉19號(hào)染色體開放閱讀框21抗體Human GPR120(G Protein Coupled Receptor 120) ELISA Kit人前列腺素F2α(PGF2α)免疫試劑盒
沼澤紅假單胞菌19號(hào)染色體開放閱讀框24抗體Human GLDL(Glycated Low Density Lipoprotein) ELISA Kit人前列腺素F(PGF)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣素抗體Human GJβ1(Gap Junction Protein Beta 1) ELISA Kit人前列腺素E2(PGE2)免疫試劑盒
對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)定性PCR檢測(cè)試劑盒: 共頭霉 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品干擾素調(diào)節(jié)因子8試劑盒四甲基姜黃素
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:GC≥98%,BR干擾素調(diào)節(jié)因子3試劑盒去氫延胡索甲素硝酸鹽
木耳Auricularia│auricula (Hook. f.) Underw. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品干擾素a-抗體試劑盒肌氨酸
短乳桿菌Lactobacillus│brevis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶2C型成員1試劑盒二氫兩面針堿
枯草芽胞桿菌枯草亞種Bacillus subtilis subsp. subtilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1試劑盒四氫表小檗堿
溝鞭藻玫瑰桿菌Dinoroseobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品鈣依賴性胞漿型磷脂酶A2試劑盒環(huán)氧前胡
使用方法:
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。