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實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：河弧菌(VF)定性PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP100152
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：RT-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
?
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
棒桿菌Ⅲ型磷酸化絲切蛋白抗體Human FGL1(Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit人泡狀過表達(dá)癌癥促生存蛋白1(VOPP1/ECOP/GASP)免疫試劑盒

中慢生華癸根瘤菌磷酸化周期檢測(cè)點(diǎn)激酶2抗體Human FGL2(Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit人排序連接蛋白3(SNX3)免疫試劑盒

庫(kù)爾勒海洋桿菌磷酸化分裂周期蛋白25抗體Human FRS2(Fibroblast Growth Factor Receptor SubstRate 2) ELISA Kit人偶聯(lián)因子6(CF6)免疫試劑盒

香菇磷酸化分裂周期蛋白25抗體Human fPSA(Free Prostate Specific Antigen) ELISA Kit人小腸堿性磷酸酶(CIAP)免疫試劑盒

木糖葡糖酸醋桿菌后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體Human FSHR(Follicle Stimulating Hormone Receptor) ELISA Kit人奶過敏原特異性IgE抗體免疫試劑盒

植物乳桿菌磷酸化CRK抗體Human FGL1(Fibrinogen Like Protein 1) ELISA Kit人兒基焦磷酸合酶(GGPS1)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌鈣粘蛋白6抗體Human FGFR4(Fibroblast Growth Factor Receptor 4) ELISA Kit人XIIIB鏈(F13B)免疫試劑盒

黃曲霉鈣粘蛋白23抗體Human FGL2(Fibrinogen Like Protein 2) ELISA Kit人XIII A1(F13A1)免疫試劑盒

羅伊氏乳桿菌小腦變性相關(guān)蛋白2抗體Human FGβ(Fibrinogen Beta) ELISA Kit人VIII(FVⅢ)免疫試劑盒

銅綠假單胞菌分裂周期2相關(guān)蛋白激酶7抗體Human FGα(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit人Ⅻ(FⅫ)免疫試劑盒

釀酒酵母A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌)Human f-Hb(Free Haemoglobin) ELISA Kit人ⅩⅢ(FⅩⅢ)免疫試劑盒

白姬松茸磷酸化角蛋白18抗體Human FLNα(Filamin A, Alpha) ELISA Kit人Ⅷ相關(guān)抗原(Ⅷ-Ag)免疫試劑盒

橙鱗傘胞嘧啶脫氨酶抗體Human FGα(Fibrinogen Alpha) ELISA Kit人Ⅶ(FⅦ)免疫試劑盒

釀酒酵母C2GNT3蛋白抗體Human FGβ(Fibrinogen Beta) ELISA Kit人Ⅴ(FⅤ)免疫試劑盒

蟋蟀草平臍蠕孢磷酸化原癌基因c-Jun抗體Human FcγR3B(Fc Fragment of IgG Low Affinity IIIb Receptor) ELISA Kit人Ⅱ(FⅡ)免疫試劑盒

細(xì)鏈格孢磷酸化原癌基因c-Jun抗體Human POTE-E(POTE-E(POTE Ankyrin Domain Family Member E)) ELISA Kit人原前體蛋白(PIVKA-II)免疫試劑盒
河弧菌(VF)定性PCR檢測(cè)試劑盒: 棒桿菌 質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR肽酶試劑盒齊墩果酮酸，3-氧代-12-烯-28-齊

冰島硫化葉菌Sulfolobus│islandicus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,eIF2α選擇性抑制劑羥化酶試劑盒當(dāng)藥苷

優(yōu)雅食烷菌Alcanivorax│venustensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR/谷氨酰富含性剪接因子試劑盒旱蓮苷D