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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價格，ELISA試劑盒報價 |
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| 參考價 | 面議 |
- 型號 50T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時間：2022-03-30 10:41:18瀏覽次數(shù)：281
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實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：亨德拉病毒(EMV)PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：CP99970
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品分類：熒光-PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
高加索鏈霉菌β-乳球蛋白抗體Human HBA1 ELISA Kit小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)免疫試劑盒
Salinicoccus alkaliphilusβ-乳球蛋白抗體Human HERPUD2 ELISA Kit小鼠鈣非依賴型磷脂酶A2(iPLA2)免疫試劑盒
Pilidium concavum緩激肽B2受體抗體Human HEATR4 ELISA Kit小鼠鈣調(diào)素(CAM)免疫試劑盒
金頂側(cè)耳(榆黃蘑)丁酰酯酶抗體(N端)Human HES5 ELISA Kit小鼠分泌型免疫球蛋白A(sIgA)免疫試劑盒
褐球固氮菌丁酰酯酶抗體(C端)Human HESX1 ELISA Kit小鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)免疫試劑盒
釀酒酵母BLAME抗體Human HEBP2 ELISA Kit小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)免疫試劑盒
竹喙球菌巴曲霉素單克隆抗體Human HEBP1 ELISA Kit小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)免疫試劑盒
釀酒酵母蛇巴曲酶抗體Human HECTD1 ELISA Kit小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)免疫試劑盒
粉肉色杯傘溴脫氧尿苷抗體Human HECTD2 ELISA Kit小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)免疫試劑盒
越南芽孢桿菌腫瘤/抗原2.2抗體Human HECTD3 ELISA Kit小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)免疫試劑盒
腸球菌屬腫瘤/抗原2.3抗體Human HELB ELISA Kit小鼠肺表面活性蛋白D(SP-D)免疫試劑盒
互生枝頂孢腫瘤/抗原2.4抗體Human HDAC5 ELISA Kit小鼠肥大類(MCT)免疫試劑盒
解拉烏爾菌腦鈉素/利鈉肽抗體Human HDAC4(Histone deacetylase 4) ELISA Kit小鼠肥大/干生長因子受體(試劑盒/Sl/CD117)免疫試劑盒
香菇B Raf抗體Human HDAC6 ELISA Kit小鼠芳香酶免疫試劑盒
腐皮鐮孢菌癌易感基因1抗體Human HAUS3 ELISA Kit小鼠二?；视?DAG/DG)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌癌易感基因2抗體Human HAX1 ELISA Kit小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)免疫試劑盒
亨德拉病毒(EMV)PCR檢測試劑盒鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量測定脫氫酶7家族,成員A1試劑盒蒲公英甾;Taraxasterol
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,二水合物可用于培養(yǎng)糖還原酶試劑盒派立辛;Parishin
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：含量測定縮酶試劑盒歐夾竹桃苷;Oleandrin
蒼白桿菌Ochrobactrum│pituitosum Huber et al. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分固酮試劑盒歐當(dāng)歸內(nèi)酯A;Levistilide A
雞傷寒沙門氏菌Salmonella│gallinarum 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR去乙酰化酶Sirtuin-7試劑盒歐前胡素;Imperatorin
黑孢屬菌種Nigrospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%去乙?；窼irtuin-6試劑盒尼泊金異酯;Isopropyl 4-H
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品去乙?；窼irtuin-5試劑盒尼泊金異丁酯;Isobutyl 4-Hy
產(chǎn)堿假單胞菌Pseudomonas│ 質(zhì)量規(guī)格：>99%去乙?；窼irtuin-4試劑盒膝甾酮;Lnokosterone
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品去乙?；窼irtuin-2試劑盒尿苷;Uridine
