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操作流程如下：

（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。

（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（6）洗板，同（4）。

（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

（9）洗板，同（4）。

（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。

我司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，凡購(gòu)買我司試劑盒的用戶，只收取試劑盒的費(fèi)用,其他輔助試劑全部免費(fèi)。我們將根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作量和難易程度，雙方協(xié)定實(shí)驗(yàn)周期，保質(zhì)保量完成委托實(shí)驗(yàn)，并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果和材料用特快專遞免費(fèi)寄送到您手中。

從標(biāo)本收集、保存、預(yù)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)、數(shù)據(jù)分析等全實(shí)驗(yàn)過(guò)程提供完整的技術(shù)指導(dǎo)。

公司采用的全是進(jìn)口原材料研，發(fā)靈敏性高，高效性，吸附均勻、吸附性好，回收利用率高、可靠性強(qiáng)，無(wú)效包退包換，公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，各種種屬ELISA試劑盒產(chǎn)品齊全，質(zhì)量可靠。

實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)：

1、所有試劑不能與皮膚直接接觸。

2、務(wù)必使用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，不準(zhǔn)用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。

3、取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈、擦干后，方可取用另一種試劑。

4、試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后將瓶放回原處。

5、已取出的試劑不能再放回原試劑瓶?jī)?nèi)。

實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品圖：

40 ng/L，5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

20 ng/L，4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10 ng/L，3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

5 ng/L，2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.5 ng/L，1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品，150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

標(biāo)本的采集與保存：

1、血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或4oC 過(guò)夜，然后1000×g 離心20 分鐘，取上清即

可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2、血漿：用EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2-8oC 1000×g 離心15 分鐘，

取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20oC 或-80oC 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預(yù)冷PBS 進(jìn)行充分研磨，該過(guò)程需在冰上進(jìn)行（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過(guò)

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證"，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái)，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風(fēng)濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解；

補(bǔ)體的控制方法：

①用EDTA稀釋標(biāo)本；

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活；

2.外源性干擾因素：包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等；

控制方法：采血時(shí)規(guī)范操作，采集的血液勿用力震蕩，以防溶血；收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管，經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存；保存時(shí)間不宜過(guò)久，檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本；對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑，并放入37℃水中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。

甲苯 無(wú)水級(jí), 99.8%（劇品）鄰苯二甲酸二異辛酯 標(biāo)準(zhǔn)溶液500μg/ml，溶劑：甲Anti-phospho-Bim(Ser55) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化死亡調(diào)解子抗體IgG

甲苯 ACS（劇品）氯中標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-Bim(phospho Ser87)/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化死亡調(diào)解子抗體IgG

甲苯 農(nóng)殘級(jí)，>99.7% (GC)（劇品）2,4-二硝基氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑：甲Anti-phospho-Bim(Ser69) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠化死亡調(diào)解子抗體IgG

甲苯 分析標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml，溶劑：甲（劇品）Anti-BIRC5/FITC  熒光素標(biāo)記凋亡抑制因子5抗體IgG

甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：二硫化碳（劇品）氯中標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品（劇品）Anti-CD203c/FITC  熒光素標(biāo)記CD203c抗體IgG

甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：甲異辛烷中o, p’-DDT標(biāo)樣 標(biāo)稱值單位：100μg/mL，分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-CD203c/RBITC  紅色熒光素羅丹明(RBITC)標(biāo)記抗CD203c抗體IgG

甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液0.99mg/ml,溶劑:甲異辛烷中p, p’-DDT標(biāo)樣 濃度的標(biāo)稱值單位：98ug/mL，分析標(biāo)準(zhǔn)品Anti-BNP/HRP  辣根過(guò)氧化物標(biāo)記兔抗人腦鈉素抗體IgG

甲苯 standard for GC, ≥99.9% (GC)p, p’-DDD標(biāo)準(zhǔn)溶液101.5mg/L,溶劑:異辛烷Anti-CD31/HRP  辣根過(guò)氧化物標(biāo)記CD31抗體IgG

Gly-LDL糖化低密度脂蛋白酶聯(lián)免疫試劑盒異丁 99%重組豬乙腦病結(jié)構(gòu)蛋白抗體beta-Amyloid(25-35)  β淀粉樣肽（25-35）抗體

二乙烯 80%羥戊激抗體beta-Amyloid(1-40)  β淀粉樣肽（1-40）抗體

二乙烯 55%Phocein蛋白抗體beta-Amyloid(1-28)  β淀粉樣肽（1-28）抗體

鉬銨，四水 AR蛋白體PSMα4/20S Proteasome α4抗體beta-Amyloid(1-16) (human)  β淀粉樣肽（1-16）抗體（人）

鉬 AR,85.0%朊病/感染性蛋白抗體beta-Amyloid(1-16)  β淀粉樣肽（1-16）抗體

二硫化鉬 AR,99%4-脂酰肌5激1樣蛋白抗體beta-Amyloid 1-40(CT)  β淀粉樣肽1-40(C端)抗體

二硫化鉬 99.5% metals basis,18000目化脂酰肌激PIK3-γ抗體beta-Amyloid 1-40(CT)  β淀粉樣肽 1-40（C端）抗體

水質(zhì)鉬標(biāo)樣 分析標(biāo)準(zhǔn)品B淋巴白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體beta-Actin (Loading Control)  β-肌動(dòng)蛋白抗體（內(nèi)參抗體）

鉬粉 SPB淋巴白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子2抗體Beta-2-MG(B2E5)  β2微球蛋白抗體(單抗)

鉬粉 99.5% metals basis，2μmB淋巴白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子4抗體Beta galactosidase  β半糖苷抗體

納米鉬粉 比表面積3-8m2/g, 粒度80nm，99.9%PUM2蛋白抗體Beta galactosidase  β半糖苷抗體

鉬鈉 AR,99.0%多調(diào)制因子結(jié)合蛋白1抗體beta COP  β衣被蛋白抗體

2-環(huán)己酮 98%B淋巴白血病前體蛋白轉(zhuǎn)錄因子3抗體beta Bax/BCL2 associated X protein  BCL2相關(guān)X蛋白抗體

二氧化鋯 99.99% metals basis植烷氧化抗體beta Adaptin/AP2  銜接蛋白β抗體

二氧化鋯 99.99% metals basis，D50：0.2～0.4μm蛋白二硫鍵異構(gòu)P4HB抗體beta 2 Microglobulin  β2微球蛋白抗體